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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Taqman 实时定光定量PCR 曲线分析
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xincer

木虫 (小有名气)

[求助] Taqman 实时定光定量PCR 曲线分析 已有1人参与

麻烦大家帮我看看 这个曲线 ，用的是Taqman探针法。1：为什么基线不平，起点会有一段降低的趋势；  2：是不是扩增效率不高，我用的MIX 是TAKARA的PREMIX hot start version (貌似是用于普通PCR 的)，20微升 的体系，10ul MIX，引物探针各0.8ul（10um）。  可不可以帮我分析一下什么原因。谢谢了。老板催得紧，做不出来，回不去过年了。。

Taqman 实时定光定量PCR 曲线分析
不同的退火温度，58-66


Taqman 实时定光定量PCR 曲线分析-1
标本
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1楼 2015-12-14 16:52:15
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苯苯兔

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、基线不平可能是样品没有混匀的缘故，一般的mix中自带甘油，所以加完样盖上管盖后建议用手轻弹后离心再上机。
2、扩增效率确实不高，还是不要用普通PCR的mix去做荧光定量了吧。这样也不知道是你的引物探针设计的不好还是人家的mix不行。
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2楼2015-12-15 09:01:13
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xincer

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 苯苯兔 at 2015-12-15 09:01:13
1、基线不平可能是样品没有混匀的缘故，一般的mix中自带甘油，所以加完样盖上管盖后建议用手轻弹后离心再上机。
2、扩增效率确实不高，还是不要用普通PCR的mix去做荧光定量了吧。这样也不知道是你的引物探针设计的 ...

嗯嗯  谢谢  我换个mix试试

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3楼2015-12-15 09:39:06
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