24小时热门版块排行榜    

查看: 1492  |  回复: 2

xincer

木虫 (小有名气)

[求助] Taqman 实时定光定量PCR 曲线分析 已有1人参与

麻烦大家帮我看看 这个曲线 ,用的是Taqman探针法。1:为什么基线不平,起点会有一段降低的趋势;  2:是不是扩增效率不高,我用的MIX 是TAKARA的PREMIX hot start version (貌似是用于普通PCR 的),20微升 的体系,10ul MIX,引物探针各0.8ul(10um)。  可不可以帮我分析一下什么原因。谢谢了。老板催得紧,做不出来,回不去过年了。。

Taqman 实时定光定量PCR 曲线分析
不同的退火温度,58-66


Taqman 实时定光定量PCR 曲线分析-1
标本
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苯苯兔

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、基线不平可能是样品没有混匀的缘故,一般的mix中自带甘油,所以加完样盖上管盖后建议用手轻弹后离心再上机。
2、扩增效率确实不高,还是不要用普通PCR的mix去做荧光定量了吧。这样也不知道是你的引物探针设计的不好还是人家的mix不行。
2楼2015-12-15 09:01:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xincer

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 苯苯兔 at 2015-12-15 09:01:13
1、基线不平可能是样品没有混匀的缘故,一般的mix中自带甘油,所以加完样盖上管盖后建议用手轻弹后离心再上机。
2、扩增效率确实不高,还是不要用普通PCR的mix去做荧光定量了吧。这样也不知道是你的引物探针设计的 ...

嗯嗯  谢谢  我换个mix试试

发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-15 09:39:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xincer 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:27 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +9 且听虎啸 2026-08-07 12/600 2026-08-07 21:53 by 理想三旬2025
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
请填处理意见