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western 检测tubulin，imageJ无法识别后面5个条带。
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大家好，我刚做western blot ，用ECL曝tubulin（42kD），曝光10s，条带有亮有浅。用imageJ检测灰度， 问题来了：浅色条带可以用魔棒（wand）检测出来，而后面亮的条带无法用wand检测，圈框大小一致，请问是什么原因呢？ 我同时用imageJ检测了同一张膜上的pMLC（18kD），也是后面的5个条带无法检测，请大家指点。 western条件：20ug上样量，垂直电泳（90V，20min；125V 至胶底），半干转40mA 、30min，5%Blocker 的TBST 室温封闭1-1.5h，一抗过夜，TBST 5min洗3次，二抗室温封闭1h，TBST 5min洗3次，ECL处理5min，曝光时间为5s、10s、自动，做过几次，结果条带都不好，请大家指点。  tubulin 自动曝光（1.5min） 20151212_122522_Ch+Marker.jpg  pMLC 自动曝光（1.5min） 20151212_121417_Ch+Marker.jpg |
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晴天1882
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