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奇怪人生123

银虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
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帖子: 73
在线: 86.6小时
虫号: 1037447
注册: 2010-06-07
性别: GG
专业: 临床分子生物学检验

[求助] 150 bp的DNA片段，电泳时出现笑脸求电泳高手相助！！！已有2人参与

实验中扩增了150 bp的条带，但是在电泳时条带总会出现弧状的黑色阴影，扩增条带恰巧就位于其中，如图。
其他信息：电泳缓冲液是0.5X TBE，2%的琼脂糖凝胶，用过TAKARA的6x Loading Buffer也用过Invitrogen的10X Loading Buffer（效果一样），其他大的片段（1kb以上的条带）从未出现过这种状况。
请问，这个黑色阴影究竟是什么？为何会把我的条带全部吸进去呢？

123.png

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实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）欢迎和大家探讨~

1楼 2015-12-14 10:02:18

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lsl635600374

银虫 (初入文坛)

应助: 8 (幼儿园)
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性别: GG
专业: 昆虫学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
奇怪人生123: 金币+14, ★★★很有帮助 2015-12-14 11:36:54
奇怪人生123: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2015-12-14 11:37:20

黑色的是loading buffer中的溴酚蓝，在2%琼脂糖凝胶中溴酚蓝迁移率与150bp线性DNA大致相同，你这个产物片段正好和溴酚蓝位置重合了
另外，6X buffer一般是DNA上样时用的，10X buffer是RNA上样时用的
最后，出现笑脸与胶和缓冲液有关，胶没凝好、缓冲液使用次数过多会出现这个情况