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xtmgah31

银虫 (小有名气)

[交流] PCR条带弱

今天做了一个PCR,扩增微生物的16S rDNA的V3区,
循环数30,20微升的体系,取3微升跑电泳检测,结果条带不是很亮,请大家帮忙分析下原因。

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-15 at 14:51 ]
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

3微升的上样量似乎少了点哦,很亮不太可能的。不知道楼主要多亮哦。要拍照的话那就多上样。
活着就要让人感受到你的存在。
2楼2008-09-22 22:09:38
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running8853

金虫 (正式写手)

3微的产物太少了
3楼2008-09-24 08:18:02
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老鼠大王

条带不太亮的原因很多。模板量,引物本身,以及扩增体系中Tap酶的含量等,找出可能原因。多做几次。呵呵看看 结果如何!我们实验室一般3-4,结果都还蛮好的
4楼2008-09-24 08:49:24
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qiaolianwen

铜虫 (正式写手)

如果你的maker加的多的话你的条带也会受影响,因为看胶的时候焦距是以maker最亮的带为标准的!
如果没有非特异性条带,也可以增加循环数!

[ Last edited by qiaolianwen on 2008-9-24 at 10:29 ]
结束了,哪些没有自我的日子;新生活,开始了!
5楼2008-09-24 10:27:37
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guoguo1738

银虫 (小有名气)

上样量少点
6楼2008-09-24 11:04:59
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huangsf8978

是不是EB用的时间太久了
7楼2008-09-25 09:57:35
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

不亮只要大小正确,做下游的载体构建等工作都是可以的
建议你可以多p几管,在回收的时候回收到一个管里,这样你的量就大了
pcr只要大小正确,不要耽误时间,继续往下做
8楼2008-09-25 16:23:11
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xuli1675


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可有时候不亮很难连上载体,转化也很易出问题
9楼2009-08-12 15:24:05
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Apfel

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
那就是你的PCR产物量太少了,产量多的话3ul足够了,检查一下PCR体系,反应程序,优化一下。
10楼2009-08-26 17:06:25
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