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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR条带弱
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xtmgah31

银虫 (小有名气)

[交流] PCR条带弱

今天做了一个PCR，扩增微生物的16S rDNA的V3区，
循环数30，20微升的体系，取3微升跑电泳检测，结果条带不是很亮，请大家帮忙分析下原因。

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-15 at 14:51 ]
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1楼 2008-09-22 16:05:17
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
3微升的上样量似乎少了点哦，很亮不太可能的。不知道楼主要多亮哦。要拍照的话那就多上样。
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活着就要让人感受到你的存在。
2楼2008-09-22 22:09:38
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running8853

金虫 (正式写手)
3微的产物太少了
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3楼2008-09-24 08:18:02
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老鼠大王

条带不太亮的原因很多。模板量，引物本身，以及扩增体系中Tap酶的含量等，找出可能原因。多做几次。呵呵看看 结果如何！我们实验室一般3-4，结果都还蛮好的
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4楼2008-09-24 08:49:24
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qiaolianwen

铜虫 (正式写手)
如果你的maker加的多的话你的条带也会受影响，因为看胶的时候焦距是以maker最亮的带为标准的！
如果没有非特异性条带，也可以增加循环数！

[ Last edited by qiaolianwen on 2008-9-24 at 10:29 ]
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结束了，哪些没有自我的日子；新生活，开始了！
5楼2008-09-24 10:27:37
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guoguo1738

银虫 (小有名气)
上样量少点
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6楼2008-09-24 11:04:59
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huangsf8978

是不是ＥＢ用的时间太久了
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7楼2008-09-25 09:57:35
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
不亮只要大小正确，做下游的载体构建等工作都是可以的
建议你可以多p几管，在回收的时候回收到一个管里，这样你的量就大了
pcr只要大小正确，不要耽误时间，继续往下做
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8楼2008-09-25 16:23:11
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xuli1675

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可有时候不亮很难连上载体，转化也很易出问题
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9楼2009-08-12 15:24:05
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Apfel

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
那就是你的PCR产物量太少了，产量多的话3ul足够了，检查一下PCR体系，反应程序，优化一下。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-08-26 17:06:25
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