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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建互补载体
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wollysam

金虫 (初入文坛)

[求助] 构建互补载体 已有1人参与

最近在构建一个目的基因的互补载体，互补片段2k，后面加了一段GFP融合表达，但是GFP是单酶切连到载体上，检测方向时，用互补片段的上游与GFP-R引物扩增，片段理论大小应该是2.7K左右，可是每次扩增后，大小总是2K，求助各位大神，这是什么原因？
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1楼 2015-12-11 16:16:47
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、首先确定GFP片段连接到了互补片段上；可以做个酶切看看是否可以得到2k和0.7k的片段，如果确定连接上了再进行下一步；
2、如果确定连接上了，可以用互补片段的（1）上游和下游片段、（2）上游和GFP的反向primer、（3）GFP的正向和反向primer分别PCR一下看看，看看出来的条带会有什么变化？跑胶的时候注意琼脂浓度，如果太低 2k和2.7k是不明显的
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2015-12-12 23:38:52
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