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wollysam

金虫 (初入文坛)

[求助] 构建互补载体 已有1人参与

最近在构建一个目的基因的互补载体,互补片段2k,后面加了一段GFP融合表达,但是GFP是单酶切连到载体上,检测方向时,用互补片段的上游与GFP-R引物扩增,片段理论大小应该是2.7K左右,可是每次扩增后,大小总是2K,求助各位大神,这是什么原因?
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、首先确定GFP片段连接到了互补片段上;可以做个酶切看看是否可以得到2k和0.7k的片段,如果确定连接上了再进行下一步;
2、如果确定连接上了,可以用互补片段的(1)上游和下游片段、(2)上游和GFP的反向primer、(3)GFP的正向和反向primer分别PCR一下看看,看看出来的条带会有什么变化?跑胶的时候注意琼脂浓度,如果太低 2k和2.7k是不明显的
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2015-12-12 23:38:52
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