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lanlan1119

金虫 (小有名气)

[交流] 急!硅胶柱层析问题,请高手指点

大家好,我用乙醇:乙酸乙酯=19:1过硅胶柱,装柱子的时候用什么溶剂装柱,我用的乙酸乙酯装柱乙酸乙酯上样可不可以啊?


还有一个问题我分离的样品是原先粗分时乙醇洗脱出来的部分,但是现在我用乙醇:乙酸乙酯=19:1再细分时,用乙酸乙酯装柱完后溶液滴出来的速度很慢,乙醇:乙酸乙酯=19:1洗出两段产物来,发现柱子顶部有一层黑色的油膜,用乙醇:水=2:1也洗不下来,不和以前一样是一段被硅胶吸附的一段黑色产物。是不是我用乙酸乙酯溶解的不好,没有溶解的部分沉淀在柱顶致使形成一层油膜。

[ Last edited by lanlan1119 on 2008-9-22 at 22:03 ]
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bronzezt

至尊木虫 (职业作家)


wingcat(金币+1,VIP+0):谢谢。
装柱一般用石油醚就可以了,石油醚溶解硅胶,缓慢上柱,注意不要使硅胶干,轻轻敲打柱排气泡。
 你用纯乙醇冲洗看看油膜能不能洗下来,因为那部分本来就是乙醇洗下来的,最好点板
2楼2008-09-22 08:49:09
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lanlan1119

金虫 (小有名气)

我用乙醇:水=2:1洗都不能完全洗下来,我用玻璃棒把那层油膜搅了一下流速一下就变快了。为什么会形成油膜,是上样的乙酸乙酯溶解性不好原因导致的吗?还是一开始流速太慢致使样品没完全带下去。
3楼2008-09-22 12:17:58
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lanlan1119

金虫 (小有名气)

各位高手帮帮忙啊

我用DMSO溶解上样又重新做了一遍,用乙醇:水=2:1洗脱之后上端还是有油膜,用一次性吸管把上部的油膜带硅胶吸出超声溶解后加入顶部乙醇:水=2:1能把其全部洗脱出。

为什么之前用乙醇水=2:1洗脱顶部会有油膜呢,我用的是15mm粗的柱子,1:100分离,上样50mg。

这部分样品点板时乙醇水=2:1能洗脱的很干净

还有一个问题就是我用乙酸乙酯装柱后又用乙醇:乙酸乙酯=19:1走柱时发现滴的很慢很慢。但用石油醚装柱乙醇:乙酸乙酯=19:1走柱时流速只是比石油醚装柱时减慢了一些但不是很慢。请各位高手帮忙解答,不胜感激!
4楼2008-09-22 22:01:59
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lanlan1119

金虫 (小有名气)

乙醇粗分出来的东西,用硅胶柱可以分吗?为什么会出现这样的问题?郁闷。
难道上样前还要用0.45微米滤膜过滤一下,晕!
5楼2008-09-22 22:08:48
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cnso

铜虫 (小有名气)

是否上样时没溶解?或者是乙醇的溶解度并不很好?
6楼2008-09-23 15:07:53
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lanlan1119

金虫 (小有名气)

现在看来应该是这个问题,留在柱顶的应该是未完全溶解的部分。洗脱剂乙醇:乙酸乙酯=19:1洗出两段,最后又用乙醇水=2:1洗出一段。留在柱顶取下的用乙醇水(2:1)溶解和用乙醇水(2:1)洗脱出来的以及洗脱剂乙醇:乙酸乙酯=19:1洗出两段点样都用乙醇走样发现。柱顶留下的部分和乙醇水洗脱下来的差不多,基本不含有乙醇:乙酸乙酯=19:1洗出的两段。

DMSO也不能小体积全部溶解大量的样品。
7楼2008-09-23 20:48:31
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