| 查看: 517 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
崩溃了，求助RT-PCR
|
|||
|
做了快两个月的RT，一直做的不好。 我是处理细胞后，测定细胞c-myc的表达变化。 前期是用没有处理的细胞摸条件，不太稳定，有时出，有时不出。而且我的大部分是要么内参，目的都不出；要么都出。要么一出条带就很漂亮，要么啥都没有。摸温度也是，要么那几个温度都出，亮度也差不多，要么什么都没有，有是连引物二聚体也没有。后来我调整了引物，模板量。把引物加倍。其中单独引物加倍，或者引物、模板都加倍的情况比较稳定。 我以为就可以了，然后处理细胞。结果一到正式做的时候又不稳定了，有时有，有时没。 开始以为是提取的问题，可是每次提取的时候都测定浓度，都跑电泳。比值大约在2，电泳条带也是三条都有，28S是18S的两倍，5S很淡。觉得提取应该没有问题。然后是PCR，我后来用TAKARA的试剂盒，可还是出现不稳定。首先用试剂盒，加样的误差也不大。而且用试剂盒作出来过，还是新分装的，应该也不会有多大问题。 我一直在想是不是反转录的问题，用的TAKARA的MMLV，按照说明操作，每次上样500ng。我不知道怎样检测反转录成工了，有人说用内参，要是内参没有出的话，是不是代表没转录成功。感觉也很少有人在反转录出问题。大多人好象是内参出了，目的没出。 时间也不多了，钱也花了不少，还做不出来。马上要毕业了，实在是着急。 请各位老师朋友指点指点，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
估计是周四
已经有3人回复
-
基金啊基金
已经有3人回复
-
科研孤儿太难了
已经有15人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有10人回复
-
言之凿凿，明天官网会通知放榜？
已经有17人回复
-
时间戳又变了
已经有17人回复
-
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有11人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有23人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有22人回复
-
放榜前的不淡定
已经有12人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2008-09-21 23:19:01
3楼2008-09-22 17:06:27
xujian568
至尊木虫 (著名写手)
Count XU
- BioEPI: 1
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 10695.8
- 红花: 7
- 帖子: 1319
- 在线: 562小时
- 虫号: 336444
- 注册: 2007-04-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2008-09-22 22:06:21
5楼2008-09-24 09:20:08
guoguo1738
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 481.6
- 帖子: 280
- 在线: 12.3小时
- 虫号: 587499
- 注册: 2008-08-22
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2008-09-24 11:08:08
