| 查看: 430 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
崩溃了，求助RT-PCR
|
|||
|
做了快两个月的RT，一直做的不好。 我是处理细胞后，测定细胞c-myc的表达变化。 前期是用没有处理的细胞摸条件，不太稳定，有时出，有时不出。而且我的大部分是要么内参，目的都不出；要么都出。要么一出条带就很漂亮，要么啥都没有。摸温度也是，要么那几个温度都出，亮度也差不多，要么什么都没有，有是连引物二聚体也没有。后来我调整了引物，模板量。把引物加倍。其中单独引物加倍，或者引物、模板都加倍的情况比较稳定。 我以为就可以了，然后处理细胞。结果一到正式做的时候又不稳定了，有时有，有时没。 开始以为是提取的问题，可是每次提取的时候都测定浓度，都跑电泳。比值大约在2，电泳条带也是三条都有，28S是18S的两倍，5S很淡。觉得提取应该没有问题。然后是PCR，我后来用TAKARA的试剂盒，可还是出现不稳定。首先用试剂盒，加样的误差也不大。而且用试剂盒作出来过，还是新分装的，应该也不会有多大问题。 我一直在想是不是反转录的问题，用的TAKARA的MMLV，按照说明操作，每次上样500ng。我不知道怎样检测反转录成工了，有人说用内参，要是内参没有出的话，是不是代表没转录成功。感觉也很少有人在反转录出问题。大多人好象是内参出了，目的没出。 时间也不多了，钱也花了不少，还做不出来。马上要毕业了，实在是着急。 请各位老师朋友指点指点，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有8人回复
-
求推荐英文EI期刊
已经有5人回复
-
最失望的一年
已经有8人回复
-
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有27人回复
-
请教限项目规定
已经有4人回复
-
推荐一本书
已经有16人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有20人回复
-
26申博
已经有3人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有10人回复
-
基金申报
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
5楼2008-09-24 09:20:08
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2008-09-21 23:19:01
3楼2008-09-22 17:06:27
xujian568
至尊木虫 (著名写手)
Count XU
- BioEPI: 1
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 10686.8
- 红花: 7
- 帖子: 1319
- 在线: 561.3小时
- 虫号: 336444
- 注册: 2007-04-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2008-09-22 22:06:21