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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 亲爱的们，遇到个棘手问题。关于大肠杆菌诱导表达蛋白问题。
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

[求助] 亲爱的们，遇到个棘手问题。关于大肠杆菌诱导表达蛋白问题。 已有5人参与

跑的SDS胶上面有条带，下面看不清，但是marker可以看清。不知道是什么原因，是蛋白不纯？没诱导出来？蛋白降解？蛋白加样量的问题？还是胶的问题？图片的marker旁边的是之前30度空载体对照，后面的是37度诱导的，但是下面不清，我的蛋白是26。已经做好几遍了，感觉心好累，不知道怎么做了。问别人说做个WB，但是如果是我的蛋白降解了，做这个有什么意义呢？我是调剂到生物技术的，没什么基础，总是失败。。。。希望大家能帮我分析下，万分感激，谢谢了
[img][/img]

亲爱的们，遇到个棘手问题。关于大肠杆菌诱导表达蛋白问题。
IMG_6988.JPG
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生物-医药
1楼 2015-12-09 21:27:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by 梦的金色城堡 at 2015-12-10 22:20:20
是25.我的蛋白是26
...

上样量确实可以降低些~我觉得你不妨把胶浓度也提高点，用13%或者15%的胶，这样分子量小些的蛋白应该也可以跑开，才可以确定下面还有没有条带
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

梦的金色城堡
10楼2015-12-11 08:56:00
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道义宙斯

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
梦的金色城堡: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-01-25 15:39:27
你的点样太多了哦  看不出啦    另外脱色也不完全  你的蛋白质有什么特殊性质吗   也可能影响跑胶效果的。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-12-10 22:57:29
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qwwzyhk

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上样量调成5ul到10ul，就能分开了

发自小木虫Android客户端
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要么忍，要么残忍，要么滚。。。
13楼2015-12-12 19:18:21
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普通回帖

a86052

金虫 (正式写手)
多大浓度的胶
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2楼2015-12-10 10:10:31
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liudayeye

木虫 (正式写手)
降低上样量试试

发自小木虫Android客户端
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3楼2015-12-10 10:45:54
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-12-10 10:10:31
多大浓度的胶

分离胶是12%的，但是marker跑开了呀，和胶有关吗

发自小木虫IOS客户端
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生物-医药
4楼2015-12-10 10:50:29
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liudayeye at 2015-12-10 10:45:54
降低上样量试试

是浓度太大了吗？我试试看。应该不是蛋白降解的问题吧？

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生物-医药
5楼2015-12-10 10:51:40
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a86052

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 梦的金色城堡 at 2015-12-10 10:50:29
分离胶是12%的，但是marker跑开了呀，和胶有关吗
...

胶上面可见的最小marker条带是多大？
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6楼2015-12-10 14:18:20
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a86052

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 梦的金色城堡 at 2015-12-10 10:50:29
分离胶是12%的，但是marker跑开了呀，和胶有关吗
...

觉得那些小一些的蛋白都在一起，没有分开
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7楼2015-12-10 14:19:15
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by a86052 at 2015-12-10 14:18:20
胶上面可见的最小marker条带是多大？...

是25.我的蛋白是26

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生物-医药
8楼2015-12-10 22:20:20
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