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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

[求助] 亲爱的们,遇到个棘手问题。关于大肠杆菌诱导表达蛋白问题。已有5人参与

跑的SDS胶上面有条带,下面看不清,但是marker可以看清。不知道是什么原因,是蛋白不纯?没诱导出来?蛋白降解?蛋白加样量的问题?还是胶的问题?图片的marker旁边的是之前30度空载体对照,后面的是37度诱导的,但是下面不清,我的蛋白是26。已经做好几遍了,感觉心好累,不知道怎么做了。问别人说做个WB,但是如果是我的蛋白降解了,做这个有什么意义呢?我是调剂到生物技术的,没什么基础,总是失败。。。。希望大家能帮我分析下,万分感激,谢谢了
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亲爱的们,遇到个棘手问题。关于大肠杆菌诱导表达蛋白问题。
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生物-医药
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by 梦的金色城堡 at 2015-12-10 22:20:20
是25.我的蛋白是26
...

上样量确实可以降低些~我觉得你不妨把胶浓度也提高点,用13%或者15%的胶,这样分子量小些的蛋白应该也可以跑开,才可以确定下面还有没有条带

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

10楼2015-12-11 08:56:00
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道义宙斯

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
梦的金色城堡: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-01-25 15:39:27
你的点样太多了哦  看不出啦    另外脱色也不完全  你的蛋白质有什么特殊性质吗   也可能影响跑胶效果的。
9楼2015-12-10 22:57:29
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qwwzyhk

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
上样量调成5ul到10ul,就能分开了

发自小木虫Android客户端
要么忍,要么残忍,要么滚。。。
13楼2015-12-12 19:18:21
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a86052

金虫 (正式写手)

多大浓度的胶
2楼2015-12-10 10:10:31
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liudayeye

木虫 (正式写手)

3楼2015-12-10 10:45:54
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-12-10 10:10:31
多大浓度的胶

分离胶是12%的,但是marker跑开了呀,和胶有关吗

发自小木虫IOS客户端
生物-医药
4楼2015-12-10 10:50:29
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liudayeye at 2015-12-10 10:45:54
降低上样量试试

是浓度太大了吗?我试试看。应该不是蛋白降解的问题吧?

发自小木虫IOS客户端
生物-医药
5楼2015-12-10 10:51:40
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a86052

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 梦的金色城堡 at 2015-12-10 10:50:29
分离胶是12%的,但是marker跑开了呀,和胶有关吗
...

胶上面可见的最小marker条带是多大?
6楼2015-12-10 14:18:20
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a86052

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 梦的金色城堡 at 2015-12-10 10:50:29
分离胶是12%的,但是marker跑开了呀,和胶有关吗
...

觉得那些小一些的蛋白都在一起,没有分开
7楼2015-12-10 14:19:15
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by a86052 at 2015-12-10 14:18:20
胶上面可见的最小marker条带是多大?...

是25.我的蛋白是26

发自小木虫IOS客户端
生物-医药
8楼2015-12-10 22:20:20
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