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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by a86052 at 2015-12-11 08:56:00
上样量确实可以降低些~我觉得你不妨把胶浓度也提高点,用13%或者15%的胶,这样分子量小些的蛋白应该也可以跑开,才可以确定下面还有没有条带...

好的,我先把蛋白稀释下看看,谢谢你

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生物-医药
11楼2015-12-12 08:46:26
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冰城'若雪

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的上样量明显多了,而且脱色不完全,胶的浓度可以增大,让条带分的更开

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12楼2015-12-12 16:46:06
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qwwzyhk

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
上样量调成5ul到10ul,就能分开了

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要么忍,要么残忍,要么滚。。。
13楼2015-12-12 19:18:21
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

谢谢大家了,今天才知道是我用错了菌,大家的样儿如果跑成这样,一定是用的克隆载体了,吸取教训…呜呜呜

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生物-医药
14楼2016-01-08 15:45:05
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

我给自己回个帖,也算是失败的经验,也给后来者们一些提醒。现在做蛋白跑胶基本没有什么问题了,跑之前最好定量,一般是加3~4ug/ml,也就是20~30ug就已经很多了。如果是改变条件做对比的话,定量后补平时用ddH2O比较好。煮沸上样前记得离心,是因为煮沸时水份等以蒸汽跑到上面,不离心直接加,会使加样量偏高。失败是成功之母,不要害怕,一起加油!

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生物-医药
15楼2016-01-25 15:48:28
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原海亮

木虫 (著名写手)

天空才是极限,我有信心飞的更高!
16楼2016-01-25 20:14:33
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sxjcas

禁虫 (知名作家)

本帖内容被屏蔽

17楼2016-01-26 00:49:01
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SuYuo

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

样品上样量太高,这个浓度起码可以稀释3倍。
蛋白上样buffer里面有变性剂,跟样品混合后蛋白酶失效就不会降解了,如果不放心处理前就先加一点蛋白酶抑制剂。
12
18楼2022-08-17 14:37:13
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