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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 亲爱的们，遇到个棘手问题。关于大肠杆菌诱导表达蛋白问题。
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by a86052 at 2015-12-11 08:56:00
上样量确实可以降低些~我觉得你不妨把胶浓度也提高点，用13%或者15%的胶，这样分子量小些的蛋白应该也可以跑开，才可以确定下面还有没有条带...

好的，我先把蛋白稀释下看看，谢谢你

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生物-医药
11楼2015-12-12 08:46:26
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冰城＇若雪

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的上样量明显多了，而且脱色不完全，胶的浓度可以增大，让条带分的更开

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12楼2015-12-12 16:46:06
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qwwzyhk

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上样量调成5ul到10ul，就能分开了

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要么忍，要么残忍，要么滚。。。
13楼2015-12-12 19:18:21
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)
谢谢大家了，今天才知道是我用错了菌，大家的样儿如果跑成这样，一定是用的克隆载体了，吸取教训…呜呜呜

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生物-医药
14楼2016-01-08 15:45:05
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)
我给自己回个帖，也算是失败的经验，也给后来者们一些提醒。现在做蛋白跑胶基本没有什么问题了，跑之前最好定量，一般是加3～4ug/ml，也就是20～30ug就已经很多了。如果是改变条件做对比的话，定量后补平时用ddH2O比较好。煮沸上样前记得离心，是因为煮沸时水份等以蒸汽跑到上面，不离心直接加，会使加样量偏高。失败是成功之母，不要害怕，一起加油！

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生物-医药
15楼2016-01-25 15:48:28
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原海亮

木虫 (著名写手)
降低上样量吧

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
16楼2016-01-25 20:14:33
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sxjcas

禁虫 (知名作家)
本帖内容被屏蔽
17楼2016-01-26 00:49:01
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SuYuo

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

样品上样量太高，这个浓度起码可以稀释3倍。
蛋白上样buffer里面有变性剂，跟样品混合后蛋白酶失效就不会降解了，如果不放心处理前就先加一点蛋白酶抑制剂。
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12
18楼2022-08-17 14:37:13
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