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亲爱的们，遇到个棘手问题。关于大肠杆菌诱导表达蛋白问题。已有5人参与
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跑的SDS胶上面有条带，下面看不清，但是marker可以看清。不知道是什么原因，是蛋白不纯？没诱导出来？蛋白降解？蛋白加样量的问题？还是胶的问题？图片的marker旁边的是之前30度空载体对照，后面的是37度诱导的，但是下面不清，我的蛋白是26。已经做好几遍了，感觉心好累，不知道怎么做了。问别人说做个WB，但是如果是我的蛋白降解了，做这个有什么意义呢？我是调剂到生物技术的，没什么基础，总是失败。。。。 希望大家能帮我分析下，万分感激，谢谢了 [img][/img]  IMG_6988.JPG |
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我给自己回个帖，也算是失败的经验，也给后来者们一些提醒。现在做蛋白跑胶基本没有什么问题了，跑之前最好定量，一般是加3～4ug/ml，也就是20～30ug就已经很多了。如果是改变条件做对比的话，定量后补平时用ddH2O比较好。煮沸上样前记得离心，是因为煮沸时水份等以蒸汽跑到上面，不离心直接加，会使加样量偏高。失败是成功之母，不要害怕，一起加油！ 发自小木虫IOS客户端 |
15楼2016-01-25 15:48:28
liudayeye
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3楼2015-12-10 10:45:54
4楼2015-12-10 10:50:29
5楼2015-12-10 10:51:40