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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助各位虫友关于同一对引物对DNA及cDNA的扩增问题
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)

[求助] 求助各位虫友关于同一对引物对DNA及cDNA的扩增问题 已有4人参与

我用同一对引物扩增DNA和cDNA中某个基因的中间序列，最后发现出来的条带一样长，是不是就说明二者的序列一样呢，我能不能用DNA的扩增产物测序代替cDNA呢，望各位虫友不吝赐教，谢谢。
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人必自助尔后天助之
1楼 2015-12-09 19:10:13
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
cDNA是DNA转录成mRNA之后，逆转录得到的，两者有相同点也有不同。
如果原核，应该是一样的。
真核由于DNA中含有外显子和内含子，可能会造成DNA和cDNA的差别。具体是cDNA中没有内含子序列而DNA中有。
扩增产物条带如果比较小，那么容易区分大小，条带大小相同说明其中可能不含有内含子序列。
但如果扩增产物较大，其中内含子有很小的话，仅看条带是不太能分得出是否真的大小一样的。
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7楼2015-12-10 09:00:03
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普通回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
各位虫友这会儿还在吃大餐啊
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人必自助尔后天助之
2楼2015-12-09 19:19:44
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
来人赐教。。。。急求。。。。
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人必自助尔后天助之
3楼2015-12-09 21:33:47
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
没有人理吗。。

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人必自助尔后天助之
4楼2015-12-10 00:06:25
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xufengnbu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两个都回收，连到t载体，送去测序看看结果。

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why is the way to success
5楼2015-12-10 00:10:09
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1202ld

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不一定，我们也有某基因的cds区设计引物，dna   cdna模版跑出来条带也是一样的，但这是因为在cds编码区设计的引物，如果要送测序，建议还是用cdna的，保证没有内含子。

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6楼2015-12-10 00:18:23
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xufengnbu at 2015-12-10 00:10:09
两个都回收，连到t载体，送去测序看看结果。

样比较多，回收了几个之后感觉时间不够打算直接用pcr反应产物送去测序

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人必自助尔后天助之
8楼2015-12-10 09:07:21
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 1202ld at 2015-12-10 00:18:23
不一定，我们也有某基因的cds区设计引物，dna   cdna模版跑出来条带也是一样的，但这是因为在cds编码区设计的引物，如果要送测序，建议还是用cdna的，保证没有内含子。
...

谢谢，那你们有没有全都测序呢

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人必自助尔后天助之
9楼2015-12-10 09:09:11
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lifechuteng at 2015-12-10 09:00:03
cDNA是DNA转录成mRNA之后，逆转录得到的，两者有相同点也有不同。
如果原核，应该是一样的。
真核由于DNA中含有外显子和内含子，可能会造成DNA和cDNA的差别。具体是cDNA中没有内含子序列而DNA中有。
扩增产物条带 ...

谢谢，900bp左右的样子不知道情况理想不，主要时间比较紧，有两个样的cdna扩增条带不明显(rna质量不够好)，现在重提来不及。。。

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人必自助尔后天助之
10楼2015-12-10 09:12:22
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