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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助各位虫友关于同一对引物对DNA及cDNA的扩增问题
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
有没有虫友用CDNA和DNA同时进行扩增并且都拿去测序的呢
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人必自助尔后天助之
11楼2015-12-10 14:22:45
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 1202ld at 2015-12-10 00:18:23
不一定，我们也有某基因的cds区设计引物，dna   cdna模版跑出来条带也是一样的，但这是因为在cds编码区设计的引物，如果要送测序，建议还是用cdna的，保证没有内含子。
...

谢谢，那请问你们都进行测序了吗。。结果怎么样
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人必自助尔后天助之
12楼2015-12-10 14:24:17
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xufengnbu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2015-12-10 09:07:21
样比较多，回收了几个之后感觉时间不够打算直接用pcr反应产物送去测序
...

pcr直接送测序的结果不一定好。

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why is the way to success
13楼2015-12-10 18:09:43
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1202ld

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2015-12-10 09:09:11
谢谢，那你们有没有全都测序呢
...

抱歉，现在才看到消息，如果是在cds区设计的引物，我师姐之前有用DNA扩增产物送去测序，也能验证，我之前都是用的cDNA扩增产物的。但因为不是同一个人的样品，还不能给你肯定的答案。如果你还是有疑问的话，同时测序好了，因为实验还是得试，何况测序其实花费并没有你在时间上的耗费要重，祝成功！

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14楼2015-12-10 18:23:48
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 1202ld at 2015-12-10 18:23:48
抱歉，现在才看到消息，如果是在cds区设计的引物，我师姐之前有用DNA扩增产物送去测序，也能验证，我之前都是用的cDNA扩增产物的。但因为不是同一个人的样品，还不能给你肯定的答案。如果你还是有疑问的话，同时测 ...

谢谢，实不相瞒，我有2个样CDNA未扩出来，估计RNA质量不好，其他都还行，现在订盒子再弄怕来不及，疯掉了，所以想着直接用DNA代替CDNA测序。
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人必自助尔后天助之
15楼2015-12-10 20:23:52
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by xufengnbu at 2015-12-10 18:09:43
pcr直接送测序的结果不一定好。
...

恩，这个我知道，但是打算试一试
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人必自助尔后天助之
16楼2015-12-10 20:24:10
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1202ld

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2015-12-10 20:23:52
谢谢，实不相瞒，我有2个样CDNA未扩出来，估计RNA质量不好，其他都还行，现在订盒子再弄怕来不及，疯掉了，所以想着直接用DNA代替CDNA测序。...

如果你是只有2个样的cDNA没扩出来，那其它样的还是送cDNA扩增产物测序，那2个样能重提rna就重提，不能就只能退而求其次，用dna扩增产物测序

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17楼2015-12-11 08:00:25
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青苹果QT

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用百分之二的琼脂糖凝聚跑电泳看看是不是有比较小的大小的差别。胶浓度越大，区分度越大。如果还是没有差别的话，那可能刚好你这个基因没有内含子。不过感觉900bp略大，我之前做的基因500左右，确实是没有内含子的，我都是直接用DNA做模板来PCR的
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18楼2015-12-11 09:14:44
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