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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

[求助] 请教细胞诱导分化实验的套路

我现在正在做干细胞诱导分化实验,就是将三种生长因子加到间充质干细胞培养基中,诱导干细胞向上皮细胞分化,但是实验结果一直不理想,WB结果一直没有好的,诱导组的角蛋白(上皮标记物)表达还没有对照组高,求各位大神指导一下怎么改进?还有如果我想在形态学上观察到干细胞分化,应该选择怎样的实验方案,有没有什么套路?总的来说希望有大神能指导我一下干细胞诱导分化实验的传统套路,我基金马上结题,十万火急,请不吝赐教,谢谢大家指导
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不是風動,亦非幡動,仁者心動
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cjs8120

木虫 (正式写手)

吱吱,不就是我研究生毕业论文嘛!

发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-12 03:18:12
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jennifermatt

木虫 (小有名气)

干细胞传代次数多了,分化能力会很弱。不知道你的细胞是传代多少次了。我也做过类似的实验,不过不是向上皮分化。不管是二维还是三维培养,细胞分化都是很明显的。基因表达差异也比较显著。各种鉴定染色也是很漂亮。可能是我自己提取细胞,很清楚它的状态。

发自小木虫Android客户端
求是
12楼2015-12-16 00:21:41
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普通回帖

我爱天津

金虫 (正式写手)

楼主 虽然我不懂 单身帮你默默顶一下帖子
敢问楼主现在是博士还是pi?

发自小木虫Android客户端
2楼2015-12-12 02:57:50
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cjs8120 at 2015-12-12 03:18:12
吱吱,不就是我研究生毕业论文嘛!

求大神指教
不是風動,亦非幡動,仁者心動
4楼2015-12-13 00:53:06
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cjs8120

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jiangyinshen at 2015-12-13 00:53:06
求大神指教...

细胞提取分离方法?培养方法是什么?

发自小木虫Android客户端
5楼2015-12-13 01:02:04
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cjs8120 at 2015-12-13 01:02:04
细胞提取分离方法?培养方法是什么?
...

从公司买的成品,公司鉴定好的间充质干细胞,用公司提供的培养基来培养
不是風動,亦非幡動,仁者心動
6楼2015-12-14 17:50:51
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cjs8120

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jiangyinshen at 2015-12-14 17:50:51
从公司买的成品,公司鉴定好的间充质干细胞,用公司提供的培养基来培养...

我是诱导BMSCs向软骨细胞分化,跟你这个还是有点不同。
请问是否有阳性对照组,与实验组和和空白组比较怎么样?
还有,我问你怎么提取分离的细胞,不仅仅是要知道细胞来源,还想知道你细胞是二维培养还是三维培养?

发自小木虫Android客户端
7楼2015-12-14 19:28:49
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cjs8120 at 2015-12-14 19:28:49
我是诱导BMSCs向软骨细胞分化,跟你这个还是有点不同。
请问是否有阳性对照组,与实验组和和空白组比较怎么样?
还有,我问你怎么提取分离的细胞,不仅仅是要知道细胞来源,还想知道你细胞是二维培养还是三维培养?
...

我是二维培养,将MSC诱导分化成上皮,方法很简单,就是将MSC先用公司提供的培养基培养,传代之后实验组加入三种生长因子,低血清培养7-14d,对照组不加生长因子,然后WB检测上皮标记物。但是WB结果不理想,居然出现实验组上皮标记物表达还没对照组高,重复好几遍都是这样,我都疯了!眼下要结题了,不知该怎么办
不是風動,亦非幡動,仁者心動
8楼2015-12-15 18:10:32
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cjs8120

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by jiangyinshen at 2015-12-15 18:10:32
我是二维培养,将MSC诱导分化成上皮,方法很简单,就是将MSC先用公司提供的培养基培养,传代之后实验组加入三种生长因子,低血清培养7-14d,对照组不加生长因子,然后WB检测上皮标记物。但是WB结果不理想,居然出现 ...

免疫组化做了吗?结果呢

发自小木虫Android客户端
9楼2015-12-15 19:02:38
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by cjs8120 at 2015-12-15 19:02:38
免疫组化做了吗?结果呢
...

只做荧光了,组化没做。荧光的结果不是那种特别亮的,所以存疑
不是風動,亦非幡動,仁者心動
10楼2015-12-15 21:50:31
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