24小时热门版块排行榜    

查看: 3103  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

[求助] 引物TM值 已有1人参与

楼前段时间做了个PCR,有个问题一直没想明白:
做的梯度PCR实验。在50度有产物,单一条带,42、44、46、48均什么都没有。楼的理解是退火温度设置较低,可能会导致非特异性扩增,但不应该什么都没有啊。请问下各位是我理解错了还是有遗漏了?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by junior850621 at 2015-12-04 01:06:05
可以这样理解:温度太低,非特异性很强,这样就有可能有很多个非特异性位点都可以利用该引物,这样就有若干个(可能多至无限多)非特异性条带。如果这些带太多了,反倒每一个都被稀释到眼不可见的程度。这样就反倒“ ...

有这个可能性。但我BLAST过引物和模版,好像不会产生这种情况的

发自小木虫IOS客户端
3楼2015-12-04 06:50:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以这样理解:温度太低,非特异性很强,这样就有可能有很多个非特异性位点都可以利用该引物,这样就有若干个(可能多至无限多)非特异性条带。如果这些带太多了,反倒每一个都被稀释到眼不可见的程度。这样就反倒“没有”非特异带了。
2楼2015-12-04 01:06:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chiden

木虫 (正式写手)

做分子实验,可能性太多,倒是觉得不用太在乎这些,有条带就好了呀

发自小木虫IOS客户端
即使难过,也要微笑着走下去
4楼2015-12-04 07:30:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by chiden at 2015-12-04 07:30:27
做分子实验,可能性太多,倒是觉得不用太在乎这些,有条带就好了呀

问题是楼这个实验是多组引物实验中的一部分,最终是要将4对引物配制到一个体系里面。有的引物Tm值需要的比50°低啊
5楼2015-12-04 16:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:22 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:19 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WQyTGMbfH7Cx 2026-08-07 4/200 2026-08-08 15:02 by oEVWOejN9taj
[基金申请] fileCode有新解读? +9 Tide man 2026-08-08 17/850 2026-08-08 14:56 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:42 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
请填处理意见