24小时热门版块排行榜    

查看: 3107  |  回复: 4

z631535213

木虫 (正式写手)

[求助] 引物TM值 已有1人参与

楼前段时间做了个PCR,有个问题一直没想明白:
做的梯度PCR实验。在50度有产物,单一条带,42、44、46、48均什么都没有。楼的理解是退火温度设置较低,可能会导致非特异性扩增,但不应该什么都没有啊。请问下各位是我理解错了还是有遗漏了?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以这样理解:温度太低,非特异性很强,这样就有可能有很多个非特异性位点都可以利用该引物,这样就有若干个(可能多至无限多)非特异性条带。如果这些带太多了,反倒每一个都被稀释到眼不可见的程度。这样就反倒“没有”非特异带了。
2楼2015-12-04 01:06:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by junior850621 at 2015-12-04 01:06:05
可以这样理解:温度太低,非特异性很强,这样就有可能有很多个非特异性位点都可以利用该引物,这样就有若干个(可能多至无限多)非特异性条带。如果这些带太多了,反倒每一个都被稀释到眼不可见的程度。这样就反倒“ ...

有这个可能性。但我BLAST过引物和模版,好像不会产生这种情况的

发自小木虫IOS客户端
3楼2015-12-04 06:50:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chiden

木虫 (正式写手)

做分子实验,可能性太多,倒是觉得不用太在乎这些,有条带就好了呀

发自小木虫IOS客户端
即使难过,也要微笑着走下去
4楼2015-12-04 07:30:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by chiden at 2015-12-04 07:30:27
做分子实验,可能性太多,倒是觉得不用太在乎这些,有条带就好了呀

问题是楼这个实验是多组引物实验中的一部分,最终是要将4对引物配制到一个体系里面。有的引物Tm值需要的比50°低啊
5楼2015-12-04 16:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 z631535213 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +4 西山十月 2026-08-09 6/300 2026-08-10 00:16 by liufeng0619
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +7 Lanmanbaby 2026-08-09 14/700 2026-08-09 23:33 by Tide man
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +4 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-09 22:24 by otj2008
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 21/1050 2026-08-09 17:21 by 天神眷顾
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见