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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 引物TM值
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z631535213

木虫 (正式写手)

[求助] 引物TM值 已有1人参与

楼前段时间做了个PCR，有个问题一直没想明白：
做的梯度PCR实验。在50度有产物，单一条带，42、44、46、48均什么都没有。楼的理解是退火温度设置较低，可能会导致非特异性扩增，但不应该什么都没有啊。请问下各位是我理解错了还是有遗漏了？

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1楼 2015-12-03 23:15:26
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以这样理解：温度太低，非特异性很强，这样就有可能有很多个非特异性位点都可以利用该引物，这样就有若干个（可能多至无限多）非特异性条带。如果这些带太多了，反倒每一个都被稀释到眼不可见的程度。这样就反倒“没有”非特异带了。
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2楼2015-12-04 01:06:05
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by junior850621 at 2015-12-04 01:06:05
可以这样理解：温度太低，非特异性很强，这样就有可能有很多个非特异性位点都可以利用该引物，这样就有若干个（可能多至无限多）非特异性条带。如果这些带太多了，反倒每一个都被稀释到眼不可见的程度。这样就反倒“ ...

有这个可能性。但我BLAST过引物和模版，好像不会产生这种情况的

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3楼2015-12-04 06:50:57
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chiden

木虫 (正式写手)
做分子实验，可能性太多，倒是觉得不用太在乎这些，有条带就好了呀

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即使难过，也要微笑着走下去
4楼2015-12-04 07:30:27
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chiden at 2015-12-04 07:30:27
做分子实验，可能性太多，倒是觉得不用太在乎这些，有条带就好了呀

问题是楼这个实验是多组引物实验中的一部分，最终是要将4对引物配制到一个体系里面。有的引物Tm值需要的比50°低啊
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5楼2015-12-04 16:57:00
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