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814257155

新虫 (初入文坛)

[求助] 麻烦哪位大神帮看一下这个引物设计行吗?已有1人参与

请教各位大神,本人想做大白猪的催乳素受体基因PRLR的引物用来测序,,以前不是学这个专业的,也没用过primer5.0,网上自学了一下,通过软件的自动设计功能做出来的引物是PRLR上游:5' CATCAGGGTATTTACTATCAG 3'
                                    下游:  5'  GGGTTAAGAATTTCGACTA 3'。不知道是否能行,希望明白的大神帮忙看下,谢谢。
附:PRLR大白猪基因
1 gtgacctgca tctttccacc agttccaggg ccaaaaataa aaggatttga cacccatctg
61 ttggaggtaa gtgccagcag tggagaatgt actgtgactg gctgctctgt tagctttctc
121 gttatatacg tgcacacagt acccatcagt ttagcctggc cggctcagcc atcccatcct
181 cgaggaccag ctgtccctcc tgttcagcac gtgtgtttac agaaagatga gggcggcatc
241 agggtattta ctatcagata ctgagtgtca gaggacaatg aaagaaaacc aaaaaaatat
301 aggaaaattt gctatgttta gcaggtctgt ttataagcac agtcataaac atttcgtaca
361 aataatcaat tgagaaagag ggtgattttt tttgtttttt taattggccg catatggaag
421 ttcccaggct cggggtctga actgatgctg cagctgctga cctacgccac agctcacagc
481 aacagcagat ccttaagtca ctgagcgagg ccagggaatg aacccacatc ctcatggata
541 ctagtcgaaa ttcttaaccc actgagccac aatgggaact ctgagggtga atattctgat
601 gcatacaaaa gagggctctc ccaccagccc ctccatcatc ctttggtata aggtcccact
661 tgaatgttct gtacagaaga cacaggaaca gaatatcctg ttcctgctgc gatttctgct
721 cagtttgagt gcccagttga gactgattca gtacagcgga gctggcattt gccagggccc
  781 atttagacac attcaagtgg gaattaaatg tgttttgaat gaaaagaagg attagaacat
  841 tttcagtttc gctgcaggtg gaaatatata gtttcaattt gaccttcagc ttaacactga
  901 tgtatagaaa agcaattacc tgcgcattat gtcacctgac ccagccacca tgaggtcaaa
961 aacacagtaa tgtgaaacgt gagtcccagg ggattggctt gactgcattc atgcagatgg
1021 caaatatgac ctgctccccc atctctagca cttaccttcg tagacccagc ataaacatct
1081 cagctaacta catgatttgt ttagctcaca atttcacctt gtagccaccg agacgtaatg
1141 atggaataac tgcttttttg agtctaaaaa aagaaaaagg aaaagttctg ggatttttaa
1201 ggacattacc tttaattctc aaaagaactt tcccagatgg gtatgacttt tcccatttta
1261 caaatagaga aactgaggat cacagaacag cttatccaaa gttacagatc ctttaataag
1321 tgatagagcc gagatttagg caacagtcct ggacctgagt cagaggatgg gggagaagag
1381 cgaaaagcag gaagaggggg catggggggg ggctgaagat taaatggagg aggaagcaga
1441 acaggagatg gagagaatat gggccgtagc ggggggactg tagggggagg aggggaaatg
1501 gagtgggagg agagaaagag taggatggga agagaaggga ggaggaggga gaggagaagg
1561 aaaagacaag aaccagctta ccacggccag actctagaaa gtagggcggg aggtcaggag
1621 gccagcaacc agatctcaga gtcagtgaat ccccaggtgc caagtgcacg catgaacact
1681 gccggtttag atgtttccca agcttgtctt attcaacagc catatttctg ttggatgtac
1741 atatactact tgcccactca actcatgctc attattgctt aaagaaagac taagtgaaaa
1801 atcatgaact gagaaatatt agctgagtag taagtagtgg gatgttagga agccgacagc
1861 tgtcttgcct tgtgtcttta acagaaaggc aagtccgaag agcttctgag cgccctggga
  1921 tgccaagact tcccccccac ttccgactgc gaggacctgc tggtggagtt tttagaagtg
  1981 ga
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
814257155: 金币+30, ★★★很有帮助, 感谢大神,不多说,分都给了。如还有能给意见的大神,继续给分。 2015-12-01 19:22:14
测序引物?是已经扩出来序列了?是要直接用PCR产物测序?还是连到载体上测序?
你这对引物扩出的片段只有300bp左右,肯定不行。
2楼2015-12-01 16:49:18
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814257155

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-12-01 16:49:18
测序引物?是已经扩出来序列了?是要直接用PCR产物测序?还是连到载体上测序?
你这对引物扩出的片段只有300bp左右,肯定不行。

首先很感谢您百忙之中能抽出时间帮助我,我现在要做的就是通过引物将母猪DNA中的PRLR基因找出来,然后进行PCR扩增,接着才是测序。您说的这段引物扩增出来只有300bp是什么原因呢?能否麻烦您教教我?之前不是学这个专业的,一窍不通,虚心求教。
3楼2015-12-01 19:20:48
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

晕死,你果然不懂的太多。
刚才看了下你的序列,你选的是一段基因组序列,里面大部分是内含子序列,你到底要做什么实验?扩出这个序列要干什么?如果要得到编码区全长,看这个链接http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_001001868.1。如果要找该基因的基因组序列,看这个链接http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NW_003612397.1,该序列的编码区为: mRNA    complement(join(335902..336924,338755..338824,
                     339335..339434,340689..340830,342988..343157,
                     348691..348860,351239..351371,354442..354511))
                     /gene="PRLR"
也就是说该基因有内含子。
如果还是不懂,建议问下周围有分子生物学基础的人,比这样快捷。
4楼2015-12-02 01:15:52
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814257155

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2015-12-02 01:15:52
晕死,你果然不懂的太多。
刚才看了下你的序列,你选的是一段基因组序列,里面大部分是内含子序列,你到底要做什么实验?扩出这个序列要干什么?如果要得到编码区全长,看这个链接http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuc ...

好的,我找找学这方面的同学问问。我这个实验想分析这个基因的多态性和基因型都有哪些,然后根据基因型给猪分组,饲喂不同浓度的精氨酸日粮,看其对繁殖性能的影响。

发自小木虫IOS客户端
5楼2015-12-02 08:55:27
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 814257155 at 2015-12-02 08:55:27
好的,我找找学这方面的同学问问。我这个实验想分析这个基因的多态性和基因型都有哪些,然后根据基因型给猪分组,饲喂不同浓度的精氨酸日粮,看其对繁殖性能的影响。
...

看多态性、基因型,那应该是要用DNA做模板扩增,这个基因这么长,你得先确定看哪个位点,然后在位点两侧设计引物,扩增后测序。
6楼2015-12-02 11:49:56
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