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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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heianduck

金虫 (正式写手)

[求助] TA克隆过程中的困惑 已有4人参与

最近在做TA克隆,一直纠结空载率的问题:同一批做的样本,里面有3个客户,有2个客户还好,空载不怎么多,但是有个客户的空载率非常的高,都已经过半了。然后我查了些资料,说是客户的样本有问题;各位大神,我想问下还有没有其他原因?如果是客户的样本问题的话,那会是什么样的样本会致使空载率高呢?
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
heianduck: 金币+1, 有帮助 2016-01-05 08:19:40
提供几个可能原因:
1. 目的片段太长,连接效率较低;
2. 客户所提供的是PCR产物么?如果是可能聚合酶的原因没有加A哦,那样会严重影响TA克隆的;
3. 如果不是用的一批载体,也可能是载体的原因,我遇到过T载体提供的连接液错误。



祝好
没有做不到,只有想不到!
4楼2015-12-01 11:45:24
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~春梦秋云~

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
现在用一步克隆法,据说克隆效率很高啊!

发自小木虫Android客户端
相信黎明不会失约,相信付出必有回报!
2楼2015-11-30 13:40:32
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iayala

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
heianduck: 金币+1, 有帮助 2016-01-05 08:19:31
是客户委托您将他们的目的片段做TA克隆吗?可能您是TA克隆实验的主体和被空载困扰的人?
一般来讲,目的片段越长,越不容易连接上载体。
还有,挑菌菌p时使用质粒自带的测序引物,比如M13引物,可以防止菌p的假阳性。
3楼2015-12-01 08:36:30
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heianduck

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 王平阳 at 2015-12-01 11:45:24
提供几个可能原因:
1. 目的片段太长,连接效率较低;
2. 客户所提供的是PCR产物么?如果是可能聚合酶的原因没有加A哦,那样会严重影响TA克隆的;
3. 如果不是用的一批载体,也可能是载体的原因,我遇到过T载体提 ...

目的片段750,比他长的连的都比较好;客户的PCR未纯化是加了A的,实验前打电话确认的;同一批做的样本,用的是同一批载体
5楼2015-12-01 12:11:22
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