应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » TA克隆过程中的困惑
61/1返回列表
查看: 1904  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

heianduck

金虫 (正式写手)

[求助] TA克隆过程中的困惑 已有4人参与

最近在做TA克隆，一直纠结空载率的问题：同一批做的样本，里面有3个客户，有2个客户还好，空载不怎么多，但是有个客户的空载率非常的高，都已经过半了。然后我查了些资料，说是客户的样本有问题；各位大神，我想问下还有没有其他原因？如果是客户的样本问题的话，那会是什么样的样本会致使空载率高呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-11-30 11:38:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

~春梦秋云~

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
现在用一步克隆法，据说克隆效率很高啊！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
相信黎明不会失约，相信付出必有回报！
2楼2015-11-30 13:40:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

iayala

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
heianduck: 金币+1, ★有帮助 2016-01-05 08:19:31
是客户委托您将他们的目的片段做TA克隆吗？可能您是TA克隆实验的主体和被空载困扰的人？
一般来讲，目的片段越长，越不容易连接上载体。
还有，挑菌菌p时使用质粒自带的测序引物，比如M13引物，可以防止菌p的假阳性。
赞一下 回复此楼
3楼2015-12-01 08:36:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
heianduck: 金币+1, ★有帮助 2016-01-05 08:19:40
提供几个可能原因：
1. 目的片段太长，连接效率较低；
2. 客户所提供的是PCR产物么？如果是可能聚合酶的原因没有加A哦，那样会严重影响TA克隆的；
3. 如果不是用的一批载体，也可能是载体的原因，我遇到过T载体提供的连接液错误。



祝好
赞一下 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
4楼2015-12-01 11:45:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heianduck

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 王平阳 at 2015-12-01 11:45:24
提供几个可能原因：
1. 目的片段太长，连接效率较低；
2. 客户所提供的是PCR产物么？如果是可能聚合酶的原因没有加A哦，那样会严重影响TA克隆的；
3. 如果不是用的一批载体，也可能是载体的原因，我遇到过T载体提 ...

目的片段750，比他长的连的都比较好；客户的PCR未纯化是加了A的，实验前打电话确认的；同一批做的样本，用的是同一批载体
赞一下 回复此楼
5楼2015-12-01 12:11:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyulin

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
heianduck: 金币+8, ★★★很有帮助 2016-01-05 08:19:56
调节一下载体和外源片段的比例到1：3；
减少载体用量；
增加筛选抗生素浓度；
外源基因也有可能本身有毒性，插入的把细菌杀死。
赞一下 回复此楼
6楼2015-12-01 12:17:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 heianduck 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 4/200 2026-11-05 23:39 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 6/300 2026-11-05 23:30 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-05 23:28 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-05 23:28 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 23:19 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 6/300 2026-11-05 23:08 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 13/650 2026-11-05 22:55 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-05 22:46 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-05 22:44 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 22:33 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-05 22:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:43 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 20:43 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:23 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 11/550 2026-11-05 20:21 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 20:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 6/300 2026-11-05 18:00 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭