应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » lncRNA的表达载体构建
51/1返回列表
查看: 7018  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

生科深似海

新虫 (小有名气)

[交流] lncRNA的表达载体构建 已有3人参与

小弟有个问题：编码蛋白的mRNA是有读码框的，因此构建某一个蛋白的过表达载体只需要将其对应的 ORF插入到载体如pcDNA3.1中。但是lncRNA是没有读码框的，因此构建一个lncRNA的过表达载体，需要注意哪些问题？
问题1：即怎么确定其要插入到载体中的lncRNA序列？其5’端和3‘端的具体位置怎么确定？根据什么？
问题2：lncRNA也有类似于ORF的元件吗？
问题3：选择什么载体合适构建lncRNA过表达载体？
问题4：有些lncRNA有polyA尾巴，有些则没有，怎么通过RT-PCR扩增lncRNA?
哪位大神交流下？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-11-27 10:26:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

上官尹悠

金虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
NCBI输入你要研究的长非编码RNA ，有些能扩增出来有些扩不出来需要合成，一般构到 pcDNA3.1上

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
努力，追求自己的追求！
2楼2015-12-02 22:16:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生科深似海

新虫 (小有名气)
谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
3楼2015-12-02 22:31:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jijunyan

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主问题解决了吗？想问过表达LncRNA的序列怎么获得呢？用基因组cDNA进行全长PCR吗？
赞一下 回复此楼
4楼2018-04-11 14:11:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChen

银虫 (正式写手)
问题1：即怎么确定其要插入到载体中的lncRNA序列？其5’端和3‘端的具体位置怎么确定？根据什么？
lncRNA序列去数据库中找，比如NCBI，Ensembl，NONCODE，精确确定lncRNA的序列需要做RACE实验。
问题2：lncRNA也有类似于ORF的元件吗？
lncRNA可能包含短的ORF
问题3：选择什么载体合适构建lncRNA过表达载体？
pcDNA系列载体就非常合适
问题4：有些lncRNA有polyA尾巴，有些则没有，怎么通过RT-PCR扩增lncRNA?
反转录时使用随机引物
赞一下 回复此楼
5楼2018-05-01 22:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 生科深似海 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +19 木水思豆 2026-08-25 22/1100 2026-08-26 06:24 by 玲珑133
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 PbwVEMK5haaE 2026-08-25 5/250 2026-08-26 05:09 by cNXvBfCpiZOM
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭