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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » lncRNA的表达载体构建
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生科深似海

新虫 (小有名气)

[交流] lncRNA的表达载体构建 已有3人参与

小弟有个问题：编码蛋白的mRNA是有读码框的，因此构建某一个蛋白的过表达载体只需要将其对应的 ORF插入到载体如pcDNA3.1中。但是lncRNA是没有读码框的，因此构建一个lncRNA的过表达载体，需要注意哪些问题？
问题1：即怎么确定其要插入到载体中的lncRNA序列？其5’端和3‘端的具体位置怎么确定？根据什么？
问题2：lncRNA也有类似于ORF的元件吗？
问题3：选择什么载体合适构建lncRNA过表达载体？
问题4：有些lncRNA有polyA尾巴，有些则没有，怎么通过RT-PCR扩增lncRNA?
哪位大神交流下？
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1楼 2015-11-27 10:26:17
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上官尹悠

金虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
NCBI输入你要研究的长非编码RNA ，有些能扩增出来有些扩不出来需要合成，一般构到 pcDNA3.1上

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努力，追求自己的追求！
2楼2015-12-02 22:16:50
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生科深似海

新虫 (小有名气)
谢谢

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3楼2015-12-02 22:31:35
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jijunyan

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主问题解决了吗？想问过表达LncRNA的序列怎么获得呢？用基因组cDNA进行全长PCR吗？
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4楼2018-04-11 14:11:15
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BioChen

银虫 (正式写手)
问题1：即怎么确定其要插入到载体中的lncRNA序列？其5’端和3‘端的具体位置怎么确定？根据什么？
lncRNA序列去数据库中找，比如NCBI，Ensembl，NONCODE，精确确定lncRNA的序列需要做RACE实验。
问题2：lncRNA也有类似于ORF的元件吗？
lncRNA可能包含短的ORF
问题3：选择什么载体合适构建lncRNA过表达载体？
pcDNA系列载体就非常合适
问题4：有些lncRNA有polyA尾巴，有些则没有，怎么通过RT-PCR扩增lncRNA?
反转录时使用随机引物
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5楼2018-05-01 22:37:20
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