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栾栾silence

银虫 (小有名气)

[求助] 肠激酶切割问题

如果用了肠激酶切割蛋白后,过高压应该有几个主峰?我过完后的图片是这个样子的,然后满心欢喜的拿了最大峰的峰尖打了质谱,可是并没有出现我的目的蛋白大小,也没有出现融合头大小的分子量,是什么问题?求各位大神!

肠激酶切割问题
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a86052

金虫 (正式写手)

是Tag?或者肠激酶?
2楼2015-11-26 14:50:17
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栾栾silence

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-26 14:50:17
是Tag?或者肠激酶?

您是说那个峰形对应的是肠激酶或者Tag吗?可是肠激酶的大小也不对应。
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3楼2015-11-26 15:57:01
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mataomatao

禁虫 (正式写手)

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4楼2015-11-28 23:36:54
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栾栾silence

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mataomatao at 2015-11-28 23:36:54
为什么不设对照,酶,酶切前蛋白出峰位置,打质谱

酶切前蛋白也过高压了,峰形基本一致。
肠激酶切割问题-1
1.png

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5楼2015-11-29 00:18:22
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mataomatao

禁虫 (正式写手)

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6楼2015-11-29 00:22:26
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栾栾silence

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by mataomatao at 2015-11-29 00:22:26
你可以跑胶检测酶切是否完全?如果不完全, c4 柱分不开,打什么质谱啊

胶跑了,跑了两次,都出问题,看不到很好的条带。

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7楼2015-11-29 00:52:42
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栾栾silence

银虫 (小有名气)

胶跑成这个样子,很无奈,又跑了一次,还是惨不忍睹,根本看不清楚条带。
肠激酶切割问题-2



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8楼2015-11-29 00:55:21
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mataomatao

禁虫 (正式写手)

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9楼2015-11-29 04:54:21
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