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sanglaibai

木虫 (小有名气)

[求助] 液相出峰 已有4人参与

液相色谱进行样品分析,出现下面情况。
同样浓度,进样量为5微升,谱图为图1
进样量为20微升,谱图为图2.
一开始怀疑谱图2中有包裹的物质,想过更改分析梯度,也是同样结果。
流动相为;A(取磷酸二氢钾5.99g,加水1100ml溶解)+(1.89g四庚基溴化铵加1000ml甲醇溶解)混匀为A项
          B 甲醇:水=22:3

液相出峰
图1.JPG


液相出峰-1
图2.JPG
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学术巨星

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sanglaibai: 金币+2, 有帮助 2015-11-25 15:24:38
图2可能是样品本身浓度很大,再加上进样量大,超过了色谱柱的负载能力,色谱柱过饱和所致。
不知道样品浓度是多少,可以降低浓度后再试验。或者如果配备的是DAD检测器,可以将图2两峰间的积分线去掉,当作一个峰来看,然后查看该组合峰的紫外吸收光谱的纯度,由此判断是否是共流出物。

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2楼2015-11-24 15:37:11
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三木山

银虫 (正式写手)

这个以前也遇见过,浓度太高导致的

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3楼2015-11-24 15:41:29
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小白鲸

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sanglaibai: 金币+3 2015-11-25 15:26:04
楼主,问一下为什么20ul和5ul出的峰峰高差不多呢?
4楼2015-11-24 18:06:56
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忠心耿耿

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
sanglaibai: 金币+1 2015-11-25 15:25:07
会不会是5的时候已经达到了柱子的最大量,所以5和20的出峰的高度几乎变化不大呢

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5楼2015-11-24 19:18:59
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sanglaibai

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小白鲸 at 2015-11-24 18:06:56
楼主,问一下为什么20ul和5ul出的峰峰高差不多呢?

这两个图浓度不一样,我没为了方便直接发了两个图,同等浓度的话,进样量大的会峰高低一些…

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6楼2015-11-24 23:29:22
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sanglaibai

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 学术巨星 at 2015-11-24 15:37:11
图2可能是样品本身浓度很大,再加上进样量大,超过了色谱柱的负载能力,色谱柱过饱和所致。
不知道样品浓度是多少,可以降低浓度后再试验。或者如果配备的是DAD检测器,可以将图2两峰间的积分线去掉,当作一个峰来看 ...

浓度是0.4mg/ml

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7楼2015-11-24 23:30:18
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sanglaibai

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by sanglaibai at 2015-11-24 23:30:18
浓度是0.4mg/ml
...

浓度也降低过,谱图也是这种情况,进样量大的时候浓度仅为0.4,如果进5,的话我尝试过浓度1.5的,峰很正常,没出现过两个峰,所以是过载的原因吗?

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8楼2015-11-24 23:33:04
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学术巨星

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
sanglaibai: 金币+2 2015-11-25 15:25:28
引用回帖:
7楼: Originally posted by sanglaibai at 2015-11-24 23:30:18
浓度是0.4mg/ml
...

浓度太高了,如果是定量分析,浓度最高才十几mg/L,而你浓度都400mg/L了,简直无法想象。

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9楼2015-11-25 07:37:31
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小白鲸

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sanglaibai at 2015-11-24 23:29:22
这两个图浓度不一样,我没为了方便直接发了两个图,同等浓度的话,进样量大的会峰高低一些…
...

进样针的问题,放个洗针的瓶。可以试试。另外为什么要不同浓度不同体积同样量进样呢

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10楼2015-11-25 07:42:43
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