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merry2004120

银虫 (小有名气)

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专业: 医学超声与声学造影剂

[求助] 请教：这个qPCR结果怎么分析？已有3人参与

本人刚开始做qPCR，不太会看曲线，请高手指点。
taqman法
粉紫色的曲线是内参，蓝色曲线是我的目的基因。
做的是两个正常样品，三副孔，但是它们的目的基因曲线上升趋势差异很大，这是什么原因？

Ct.png

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1楼2015-11-23 09:47:36

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merry2004120

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-11-24 08:54:37
内参做的还可以。两只兔子个体，该基因表达量有差异也是正常的吧，你可以同一只兔子分别提两个平行样看看有没有差异。对这个结果，Ct值偏低，你可以加大模板用量（别超过10%）看看效果，或者从样品处理及RNA提取-反 ...

同一只兔子提两个平行样是要排除操作误差吗？
之前，我分两次提了四只正常兔子，分两次做的qPCR结果也是一个曲线斜率大，一个曲线比较低平。每次都是同时提取、RT、qPCR，但曲线就是出现不同的趋势。很让我郁闷！

我RT体系20ul，RNA加1000ng
qPCR体系20ul，cDNA加1ul

是不是将cDNA增加到2ul？
如果没有太大变化，将RT时RNA量增加到2000ng，是这样改进吗？

请问，反应效率怎么看？