【答案】应助回帖

» 猜你喜欢

1楼2015-11-23 09:47:36

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

应助: 35 (小学生)
金币: 15171.7
红花: 34
帖子: 1346
在线: 309.7小时
虫号: 2444856
注册: 2013-05-02
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★
merry2004120: 金币+3, ★有帮助 2015-11-25 10:31:01

内参做的还可以。两只兔子个体，该基因表达量有差异也是正常的吧，你可以同一只兔子分别提两个平行样看看有没有差异。对这个结果，Ct值偏低，你可以加大模板用量（别超过10%）看看效果，或者从样品处理及RNA提取-反转录的角度考虑下有没有问题，特别是两个样品，各步提取及反应效率是否一样。

赞一下(1人)

6楼2015-11-24 08:54:37

普通回帖

S一缕阳光h

木虫 (著名写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 6378.8
散金: 6
红花: 1
帖子: 1410
在线: 57.5小时
虫号: 4226894
注册: 2015-11-17
专业: 动物遗传学

正在学习中～～

发自小木虫Android客户端

2楼2015-11-23 09:54:48

lw19850128

银虫 (小有名气)

应助: 13 (小学生)
金币: 477.2
红花: 1
帖子: 159
在线: 61.9小时
虫号: 1091028
注册: 2010-09-06
性别: GG
专业: 植物遗传学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

平行做的有问题了吧？用枪的时候细心点，最好统一混一个体系在分装。

3楼2015-11-23 09:57:33

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

应助: 35 (小学生)
金币: 15171.7
红花: 34
帖子: 1346
在线: 309.7小时
虫号: 2444856
注册: 2013-05-02
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

能不能把曲线代表什么说清楚？除了粉色蓝色，还有几条线啊，不知道代表什么样品。

4楼2015-11-23 15:19:42

merry2004120

银虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 242
帖子: 70
在线: 30小时
虫号: 2537715
注册: 2013-07-08
专业: 医学超声与声学造影剂

引用回帖:

4楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-11-23 15:19:42
能不能把曲线代表什么说清楚？除了粉色蓝色，还有几条线啊，不知道代表什么样品。

用两只正常兔子做的qPCR，每只兔子设3副孔
所以，内参是6条曲线
奇怪的是，我的目的基因，两只正常兔子的曲线趋势不一样。
为什么两只正常兔子同一基因表达曲线会差别这么大？
下一步该怎么做？求指教。

Ct.png

5楼2015-11-23 16:40:29

merry2004120

银虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 242
帖子: 70
在线: 30小时
虫号: 2537715
注册: 2013-07-08
专业: 医学超声与声学造影剂

引用回帖:

6楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-11-24 08:54:37
内参做的还可以。两只兔子个体，该基因表达量有差异也是正常的吧，你可以同一只兔子分别提两个平行样看看有没有差异。对这个结果，Ct值偏低，你可以加大模板用量（别超过10%）看看效果，或者从样品处理及RNA提取-反 ...

同一只兔子提两个平行样是要排除操作误差吗？
之前，我分两次提了四只正常兔子，分两次做的qPCR结果也是一个曲线斜率大，一个曲线比较低平。每次都是同时提取、RT、qPCR，但曲线就是出现不同的趋势。很让我郁闷！

我RT体系20ul，RNA加1000ng
qPCR体系20ul，cDNA加1ul

是不是将cDNA增加到2ul？
如果没有太大变化，将RT时RNA量增加到2000ng，是这样改进吗？

请问，反应效率怎么看？

7楼2015-11-25 10:30:14