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相思以桀

金虫 (小有名气)

[求助] 胃蛋白酶酶解胶原之后怎么灭活啊,同时还要保持胶原的活性? 已有7人参与

高温灭活肯定行不通了,因为高温会使胶原变性;调ph倒是可以考虑,可是我今天试了用10mol/L的氢氧化钠溶液调ph,结果刚调到4.多胶原就聚集了,如图所示,请问这是什么原因呢?ps:因为这个导致我这俩星期的工作都白费了,好桑心

胃蛋白酶酶解胶原之后怎么灭活啊,同时还要保持胶原的活性?
IMG_20151120_175051.jpg
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科研就是一条不归路啊
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15541223321

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 相思以桀 at 2015-11-20 19:28:02
胶原理论上应该是I型的,我之前没有用水溶,是乙酸溶解进行提取的,可是看文献中说要调节ph进行酶灭活所以才尝试的。胃蛋白酶分子量大约35000D好像,透析应该就可以除去吧。另外,你试过调ph对酶灭活吗,用的多大浓 ...

通过调ph灭活这说法是不对的,只能说抑制他的活性,不让他继续酶解了,

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4楼2015-11-20 19:31:12
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15541223321

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
相思以桀: 金币+1, 有帮助 2015-11-20 19:28:25
你的胶原是哪个型的,胶原分子量是比较大的,是疏水性的,只有水解过度成多肽的时候才变成水溶性的,不过这不是你想要的吧,,,,所以团聚是正常的,另外注意naoh调ph,一定先稀释再用,否则会变性的。。。至于酶怎么分离出来,楼主可以根据胶原分子量远大于酶分子量来分离。具体有什么手段,解决了之后麻烦分享一下,谢谢

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2楼2015-11-20 19:14:56
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15541223321

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 相思以桀 at 2015-11-20 19:43:18
现在的关键不是这些理论性的东西,我想知道我调ph为什么胶原聚集了,而文献中却都在说用氢氧化钠调ph到10,然后他们还能继续离心啊,盐析啊这些步骤...

胶原溶于酸,不易溶于水

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7楼2015-11-20 19:45:25
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南窗隐者

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
相思以桀: 金币+2, 有帮助 2015-11-22 10:14:40
我也在用胶原溶液调pH,期间也出现过团聚的情况,应该是到等电点的缘故吧,若远离等电点还是会重新溶解的,你可以快速加入碱,直接绕过等电点就不会出现团聚了。

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在知识的海洋里任我飘荡
9楼2015-11-22 00:21:28
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