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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 高分子生物材料 » 胃蛋白酶酶解胶原之后怎么灭活啊，同时还要保持胶原的活性？
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相思以桀

金虫 (小有名气)

[求助] 胃蛋白酶酶解胶原之后怎么灭活啊，同时还要保持胶原的活性？ 已有7人参与

高温灭活肯定行不通了，因为高温会使胶原变性；调ph倒是可以考虑，可是我今天试了用10mol/L的氢氧化钠溶液调ph，结果刚调到4.多胶原就聚集了，如图所示，请问这是什么原因呢？ps：因为这个导致我这俩星期的工作都白费了，好桑心

胃蛋白酶酶解胶原之后怎么灭活啊，同时还要保持胶原的活性？
IMG_20151120_175051.jpg
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科研就是一条不归路啊
1楼 2015-11-20 18:42:36
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相思以桀

金虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 超入Superman at 2016-01-09 15:38:01
一般用磷酸缓冲液

那是不是ph变化特别慢，调一个ph就要很久很久？

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科研就是一条不归路啊
23楼2016-01-09 16:05:25
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15541223321

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
相思以桀: 金币+1, ★有帮助 2015-11-20 19:28:25
你的胶原是哪个型的，胶原分子量是比较大的，是疏水性的，只有水解过度成多肽的时候才变成水溶性的，不过这不是你想要的吧，，，，所以团聚是正常的，另外注意naoh调ph，一定先稀释再用，否则会变性的。。。至于酶怎么分离出来，楼主可以根据胶原分子量远大于酶分子量来分离。具体有什么手段，解决了之后麻烦分享一下，谢谢

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2楼2015-11-20 19:14:56
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15541223321

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 相思以桀 at 2015-11-20 19:28:02
胶原理论上应该是I型的，我之前没有用水溶，是乙酸溶解进行提取的，可是看文献中说要调节ph进行酶灭活所以才尝试的。胃蛋白酶分子量大约35000D好像，透析应该就可以除去吧。另外，你试过调ph对酶灭活吗，用的多大浓 ...

通过调ph灭活这说法是不对的，只能说抑制他的活性，不让他继续酶解了，

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4楼2015-11-20 19:31:12
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15541223321

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 相思以桀 at 2015-11-20 19:43:18
现在的关键不是这些理论性的东西，我想知道我调ph为什么胶原聚集了，而文献中却都在说用氢氧化钠调ph到10，然后他们还能继续离心啊，盐析啊这些步骤...

胶原溶于酸，不易溶于水

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7楼2015-11-20 19:45:25
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