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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » OD600和菌浓的关系
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哥借你肩膀

新虫 (初入文坛)

[求助] OD600和菌浓的关系 已有2人参与

大家好，我最近在做两株乳酸菌的菌浓测定，我的测定方法是：
   1.从平板里挑单菌落接种到50ml液体MRS培养基20小时
   2.4500转 5 分钟离心去培养基，用5mlPBS重悬，再离心，重复三次
   3.用PBS悬浮菌体测OD值，OD值分别为0.2,0.4,0.6,0.8,1.0，再分别稀释涂布，确定菌浓
   我因为要用这种方法，乳酸菌PBS悬液加入养有肠癌细胞的12孔板里做细胞粘附实验，才没有用培养基做空白，请帮我看看有什么问题吗？谢谢啊！！！
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1楼 2015-11-20 09:11:56
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齐宝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主，我最近也要做乳酸菌的细胞粘附试验，看了一些文献，基本上都是乳酸菌体用细胞培养基悬浮的。不知道对不对，可以互相讨论一下。
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2楼2015-11-20 14:59:20
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3306549

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测OD600先做标曲，OD=1.0的数据不可信
离心都是按G，不知道你的离心机型号，但是不要大于4000G
一般都是用细胞培养液重悬，但注意加的是无双抗的培养液

另外多说句，你这个基本做烂了，我带的本科生才做这个毕业...
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3楼2015-11-20 21:14:51
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哥借你肩膀

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 齐宝 at 2015-11-20 14:59:20
楼主，我最近也要做乳酸菌的细胞粘附试验，看了一些文献，基本上都是乳酸菌体用细胞培养基悬浮的。不知道对不对，可以互相讨论一下。

好的啊…你也是做乳酸菌的？

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4楼2015-11-22 23:56:50
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哥借你肩膀

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 3306549 at 2015-11-20 21:14:51
测OD600先做标曲，OD=1.0的数据不可信
离心都是按G，不知道你的离心机型号，但是不要大于4000G
一般都是用细胞培养液重悬，但注意加的是无双抗的培养液

另外多说句，你这个基本做烂了，我带的本科生才做这个毕 ...

嗯啊…我就是用这个方法确定下菌浓，然后要用10八次方到九次方的1ml PBS悬浮液加到细胞孔板里做细胞实验

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5楼2015-11-23 00:05:13
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哥借你肩膀

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 齐宝 at 2015-11-20 14:59:20
楼主，我最近也要做乳酸菌的细胞粘附试验，看了一些文献，基本上都是乳酸菌体用细胞培养基悬浮的。不知道对不对，可以互相讨论一下。

我的细胞是肠癌细胞，我看得文献都是用的PBS悬浮菌加到孔板里的

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6楼2015-11-23 00:08:01
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齐宝

铁杆木虫 (正式写手)
我做的也是肠癌细胞，我看的文献基本是用高糖培养基重悬。但是我们是食品相关，可能不一样。估算菌数用吸光值应该可以，就是可能没那么准确.

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7楼2015-11-23 08:09:01
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齐宝

铁杆木虫 (正式写手)
楼主，我又看了一下，用DMEM重悬的目的应该是直接加到培养板后就不用补充培养基了。如果你加的菌悬液少的话，也可以再补充培养基。楼主，你开始做了吗？想问下你12孔板，每孔加量是多少啊？我用的24孔板。

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8楼2015-11-23 13:15:55
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哥借你肩膀

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 齐宝 at 2015-11-23 13:15:55
楼主，我又看了一下，用DMEM重悬的目的应该是直接加到培养板后就不用补充培养基了。如果你加的菌悬液少的话，也可以再补充培养基。楼主，你开始做了吗？想问下你12孔板，每孔加量是多少啊？我用的24孔板。
...

我用的方法是在孔板里加一毫升PBS悬浮之后，又加了1毫升培养基。
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9楼2015-11-23 14:28:00
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