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哥借你肩膀

新虫 (初入文坛)

[求助] OD600和菌浓的关系 已有2人参与

大家好,我最近在做两株乳酸菌的菌浓测定,我的测定方法是:
   1.从平板里挑单菌落接种到50ml液体MRS培养基20小时
   2.4500转 5 分钟离心去培养基,用5mlPBS重悬,再离心,重复三次
   3.用PBS悬浮菌体测OD值,OD值分别为0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,再分别稀释涂布,确定菌浓
   我因为要用这种方法,乳酸菌PBS悬液加入养有肠癌细胞的12孔板里做细胞粘附实验,才没有用培养基做空白,请帮我看看有什么问题吗?谢谢啊!!!
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齐宝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主,我最近也要做乳酸菌的细胞粘附试验,看了一些文献,基本上都是乳酸菌体用细胞培养基悬浮的。不知道对不对,可以互相讨论一下。
2楼2015-11-20 14:59:20
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3306549

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
测OD600先做标曲,OD=1.0的数据不可信
离心都是按G,不知道你的离心机型号,但是不要大于4000G
一般都是用细胞培养液重悬,但注意加的是无双抗的培养液

另外多说句,你这个基本做烂了,我带的本科生才做这个毕业...
3楼2015-11-20 21:14:51
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哥借你肩膀

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 齐宝 at 2015-11-20 14:59:20
楼主,我最近也要做乳酸菌的细胞粘附试验,看了一些文献,基本上都是乳酸菌体用细胞培养基悬浮的。不知道对不对,可以互相讨论一下。

好的啊…你也是做乳酸菌的?

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4楼2015-11-22 23:56:50
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哥借你肩膀

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 3306549 at 2015-11-20 21:14:51
测OD600先做标曲,OD=1.0的数据不可信
离心都是按G,不知道你的离心机型号,但是不要大于4000G
一般都是用细胞培养液重悬,但注意加的是无双抗的培养液

另外多说句,你这个基本做烂了,我带的本科生才做这个毕 ...

嗯啊…我就是用这个方法确定下菌浓,然后要用10八次方到九次方的1ml PBS悬浮液加到细胞孔板里做细胞实验

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5楼2015-11-23 00:05:13
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哥借你肩膀

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 齐宝 at 2015-11-20 14:59:20
楼主,我最近也要做乳酸菌的细胞粘附试验,看了一些文献,基本上都是乳酸菌体用细胞培养基悬浮的。不知道对不对,可以互相讨论一下。

我的细胞是肠癌细胞,我看得文献都是用的PBS悬浮菌加到孔板里的

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6楼2015-11-23 00:08:01
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齐宝

铁杆木虫 (正式写手)

我做的也是肠癌细胞,我看的文献基本是用高糖培养基重悬。但是我们是食品相关,可能不一样。估算菌数用吸光值应该可以,就是可能没那么准确.

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7楼2015-11-23 08:09:01
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齐宝

铁杆木虫 (正式写手)

楼主,我又看了一下,用DMEM重悬的目的应该是直接加到培养板后就不用补充培养基了。如果你加的菌悬液少的话,也可以再补充培养基。楼主,你开始做了吗?想问下你12孔板,每孔加量是多少啊?我用的24孔板。

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8楼2015-11-23 13:15:55
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哥借你肩膀

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 齐宝 at 2015-11-23 13:15:55
楼主,我又看了一下,用DMEM重悬的目的应该是直接加到培养板后就不用补充培养基了。如果你加的菌悬液少的话,也可以再补充培养基。楼主,你开始做了吗?想问下你12孔板,每孔加量是多少啊?我用的24孔板。
...

我用的方法是在孔板里加一毫升PBS悬浮之后,又加了1毫升培养基。
9楼2015-11-23 14:28:00
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