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miRNA实时定量相关一些问题。 已有1人参与
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极端菜鸟一枚。请教各位大神些问题，或许很无知，但请各位不吝赐教~小女子拜谢~ 1，miRNA做加尾反转录的时候，可以用总RNA么？ 2.交由公司提取的RNA经我检测DNA污染严重，虽然不会影响反转录。但后面定量会收到影响，怎么去除基因组DNA？常规试剂盒里的去除体系BUFFER有影响么？ 3.反转录后的DNA如何检测？每一个miRNA反转录后的cDNA是在一个管子里的，怎么检测？如果用后面QPCR的内参（ 5s rRNA）做反转录检测，有代表性么（内参不用加尾，只需反转录？）， 4.引物设计看文献里定量上游引物包含5'端通用序列＋3'端miRNA特异序列。下游则是通用序列（反转录引物的部分）。而我买的定量试剂盒里说可以简单设计上游引物为miRNA序列。有什么区别？只是长度么？ 5.定量时5srRNA的引物设计？下游引物也用通用序列还是上下游重新设计？ 手机码字，请教大神，真心不懂。实验室里也没个懂的师兄师姐。救我一人摸索。  发自小木虫Android客户端 |
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