24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

齐洛儿

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 62
帖子: 29
在线: 3.2小时
虫号: 4228980
注册: 2015-11-18
性别: MM
专业: 作物分子育种

[求助] miRNA实时定量相关一些问题。已有1人参与

极端菜鸟一枚。请教各位大神些问题，或许很无知，但请各位不吝赐教~小女子拜谢~
1，miRNA做加尾反转录的时候，可以用总RNA么？
2.交由公司提取的RNA经我检测DNA污染严重，虽然不会影响反转录。但后面定量会收到影响，怎么去除基因组DNA？常规试剂盒里的去除体系BUFFER有影响么？
3.反转录后的DNA如何检测？每一个miRNA反转录后的cDNA是在一个管子里的，怎么检测？如果用后面QPCR的内参（ 5s rRNA）做反转录检测，有代表性么（内参不用加尾，只需反转录？），
4.引物设计看文献里定量上游引物包含5'端通用序列＋3'端miRNA特异序列。下游则是通用序列（反转录引物的部分）。而我买的定量试剂盒里说可以简单设计上游引物为miRNA序列。有什么区别？只是长度么？
5.定量时5srRNA的引物设计？下游引物也用通用序列还是上下游重新设计？
手机码字，请教大神，真心不懂。实验室里也没个懂的师兄师姐。救我一人摸索。

发自小木虫Android客户端

回复此楼