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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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齐洛儿

新虫 (初入文坛)

[求助] miRNA实时定量相关一些问题。 已有1人参与

极端菜鸟一枚。请教各位大神些问题,或许很无知,但请各位不吝赐教~小女子拜谢~
1,miRNA做加尾反转录的时候,可以用总RNA么?
2.交由公司提取的RNA经我检测DNA污染严重,虽然不会影响反转录。但后面定量会收到影响,怎么去除基因组DNA?常规试剂盒里的去除体系BUFFER有影响么?
3.反转录后的DNA如何检测?每一个miRNA反转录后的cDNA是在一个管子里的,怎么检测?如果用后面QPCR的内参( 5s rRNA)做反转录检测,有代表性么(内参不用加尾,只需反转录?),
4.引物设计看文献里定量上游引物包含5'端通用序列+3'端miRNA特异序列。下游则是通用序列(反转录引物的部分)。而我买的定量试剂盒里说可以简单设计上游引物为miRNA序列。有什么区别?只是长度么?
5.定量时5srRNA的引物设计?下游引物也用通用序列还是上下游重新设计?
手机码字,请教大神,真心不懂。实验室里也没个懂的师兄师姐。救我一人摸索。

miRNA实时定量相关一些问题。


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齐洛儿

新虫 (初入文坛)

图片是常规去除基因组DNA的方法,Buffer会对后面实验产生影响么?

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2楼2015-11-19 16:59:23
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yjqhades

禁虫 (初入文坛)

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3楼2015-11-27 09:59:08
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yjqhades

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4楼2015-11-27 10:15:46
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