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Esther_zhang

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒线性化和纯化步骤已有1人参与

虫友们,我做转染前想把质粒先用一个酶切位点线性化,不知道具体该如何操作,酶切位点是平末端的,要不要去磷酸化?
还有,如何纯化适合做后续的转染?
谢谢大家了,如果有具体的操作步骤,那更是极好的。
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15853830932

木虫 (小有名气)

如果你想做去磷酸化也可以。这样保险点,其实自连不是很多的。酶切完你做个清洁,把盐离子等物质洗脱掉就可以做转化了。

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If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
4楼2015-11-18 16:36:19
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15853830932

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Esther_zhang at 2015-11-20 11:26:55
谢谢回复。请问质粒单酶切后要纯化才能做去磷酸化吗?去磷酸化后如何纯化?我看TAKARA公司的CIAP说明书,用酚氯仿的方法,不知道可行不可行?...

清洁完才能去磷酸化,去磷酸化我们也是用CIAP酶,半个小时左右就可以了。你直接用酶就行了啊

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If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
6楼2015-11-20 15:11:11
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