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小花木兰

银虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌发酵异常现象 已有2人参与

最近大肠杆菌发酵,总是大罐上移种后几小时内起大量泡沬、PH上升,OD下降同时溶氧上升,但是平板测不到噬菌体,镜检没有发现染菌,同样用5升罐发酵时也现相近情况,接种后3小时左右开始起泡沫,而且溶氧下降到40%~50%又即开始回升到100% 并且一直维持在100%  继续培养约10多小时,又开始出现生长现象,溶氧又慢慢下降直到接近0%,什么原因,不知大家找到没有?
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hc2015

新虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.保种,很关键,终浓度甘油10%也就是800vl菌液,200vl50%的灭菌甘油。多保几管,用一管不要反复冻融,负80度或负44度,负20度不行。保种前最好平板在赛一次菌,保菌菌液最好控制在OD1-2之前,最好测序看下你现在的菌有没问题2.优化培养基,减少酵母粉的量,3.优化诱导时的温度,诱导剂终浓度,诱导剂添加时间。先把这些试了再说,不行再交流,祝顺利
2楼2015-11-16 10:18:23
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a2703521

金虫 (小有名气)

123

溶氧下降到40%-50%又上升到100%用了多长时间?放置10h以后有没有做杂菌方面的检测?还有你的培养基是不是有加抗生素?
3楼2015-11-19 16:21:04
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小花木兰

银虫 (小有名气)

大约用半小时左右,经检测绝对没有染菌,我也是加了抗生素的。而且以前一直这样做法,好好的
4楼2015-11-19 19:50:19
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Project D

新虫 (小有名气)

不是染菌的问题,是移种的问题,通过泡沫和ph上升看,可能是移种早了,种子没长好

发自小木虫Android客户端
5楼2015-11-19 20:00:13
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二在奔三路上

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

“大量泡沬、PH上升,OD下降同时溶氧上升”这种情况应该是随着菌体生长,培养基出现了营养物质匮乏,糖氮缺少都会出现这种情况,“但是平板测不到噬菌体,镜检没有发现染菌”,根据后续情况菌体恢复生长和噬菌体检测判断,应该是没有染噬菌体,“ 继续培养约10多小时,又开始出现生长现象,溶氧又慢慢下降直到接近0%”,出现这种问题,很有可能是菌体适应了新的c源,重新生长,根据你描述的情况,仅以个人意见判断,你们摇瓶培养基应该是加的大肠杆菌优先利用的c源,如葡萄糖等,而发酵罐培养基可能利用的非糖类碳源,或者是糖类碳源过少,信息不多,具体情况比较复杂,可以多做摇瓶试验
6楼2015-12-29 10:00:33
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小花木兰

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Project  D at 2015-11-19 20:00:13
不是染菌的问题,是移种的问题,通过泡沫和ph上升看,可能是移种早了,种子没长好

移种时,种子达到多少OD较好
7楼2016-03-27 16:01:12
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zeropoint555

新虫 (初入文坛)

不知道楼主的问题找到原因没?我们遇到了同样的问题
8楼2017-09-07 10:24:19
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13811214897

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zeropoint555 at 2017-09-07 10:24:19
不知道楼主的问题找到原因没?我们遇到了同样的问题

这都几年前的帖子

发自小木虫Android客户端
9楼2017-09-07 19:25:49
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