| 查看: 4617 | 回复: 38 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
天啊，长得全是白斑，没有蓝斑？蓝白斑筛选问题求助已有7人参与
|
||
|
这两天做蓝白斑筛选，新手第一次做，今天观察平板时发现涂的10个板全部都是只长了白斑，一个蓝斑都没有看到？这是神马情况—————— 我先说下我做的过程，大神看看是不是哪里出了问题： 连接：切胶回收后我检测了回收的DNA后，开始做的转化，连接用的是takara公司的18T载体，按照说明做成10ul体系，连接了6小时，（我的目的片段在1000bp以下，说明书上写只需30分钟）。 转化：转化用的takara公司的DH5α感受态细胞50ul和10ul的连接产物，按照说明书进行转化操作，并加入500ul的soc培养基，混匀，37℃揺菌1小时。 涂板：我在每个板上涂了50mg/ml的IPTG20ul，20mg/ml的x-gal45ul（药品都是上周刚配的，x-gal也用锡箔纸包裹了），涂匀，盖上盖子，倒置超净台，关灯，放置一会儿。然后揺菌结束，菌液4000转，离心2-3min，弃上清，剩300ul左右菌液，平均涂到了2个处理过的平板上，封好后倒置与37℃恒温箱过夜培养。 下边这张图是培养了12小时左右拍的，10个板子全是只长白斑，一个蓝斑都没有。于是做了如下处理： 1.选2个板子37℃继续培养2小时，菌变大了，但是还是没有蓝色。 2.选8个放进了4℃冰箱，希望能抑制生长，另外看看能不能出现蓝斑，可是三四个小时后，还是没有出现蓝斑!!! 怎么破啊？大神们！看长出来的情况应该是我涂的菌液太多了，我操作过程有没有问题啊？什么情况导致了全白无蓝？蓝色显色很难吗？  IMG20151115101026.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有111人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
-
推荐一些基础有机化学的实验教程
已经有0人回复
-
探秘高分子世界：链动微观，筑就材料新篇
已经有0人回复
-
科研赋能时尚宠物：检测护航，焕新养宠体验
已经有0人回复
-
精测粗蛋白：以科研标尺，守品质核心
已经有0人回复
-
解码碳水世界：科研探秘，赋能营养与应用
已经有0人回复
-
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
gzbjzjchen
铜虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 356.9
- 红花: 2
- 帖子: 110
- 在线: 41.1小时
- 虫号: 2864928
- 注册: 2013-12-11
- 专业: 免疫生物学
4楼2015-11-15 18:21:09
gzbjzjchen
铜虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 356.9
- 红花: 2
- 帖子: 110
- 在线: 41.1小时
- 虫号: 2864928
- 注册: 2013-12-11
- 专业: 免疫生物学
wcq吴超群2楼2015-11-15 18:15:56
3楼2015-11-15 18:18:51
|
你的意思是我直接挑白色单菌落，菌液pcr，有目的条带的，送去测序？我pcr出来的不是单一基因序列，用的通用引物，目的基因长度也不一张，之所以做克隆，就是为了尽可能筛选分离开这些不同序列。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2015-11-15 18:25:56