应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 发现一个很奇怪的现象，同样引物，条件，体系，cDNA能扩出来，gDNA扩不出。。。
241/1返回列表
查看: 2177  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)

[交流] 发现一个很奇怪的现象，同样引物，条件，体系，cDNA能扩出来，gDNA扩不出。。。

DNA昨晚已跑电泳，证实并未降解

发现一个很奇怪的现象，同样引物，条件，体系，cDNA能扩出来，gDNA扩不出。。。
QQ截图20151111152824.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2015-11-11 15:30:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

草溪河

铁虫 (著名写手)
★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
很正常，比如要是引物位于两个外显子间就不容易扩出来

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-11-11 15:44:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我爱罗的风沙

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-11-12 21:51:20
楼主好。CDNA是纯净的DNA，1比1合适，要么P出要么P不出；gDNA有许许多多非特异性产物能和他匹配，能否P出来，与它的浓度以及你引物浓度比例也有关。所以CDNA能扩出不代表gDNA能扩出。楼主可以假象，1mol gDNA中只有0.1mol 相应的CDNA啦~
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2015-11-12 00:18:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

angelyou

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是不是引物刚好是跨内含子的，就是所以在gDNA上就没有这段连续的序列可以配上
赞一下(1人) 回复此楼
23楼2015-11-12 21:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
第2、3泳道是cDNA扩的，67泳道是DNA扩的
赞一下 回复此楼
2楼2015-11-11 15:31:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XuanyuanLand

银虫 (小有名气)
★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
路过

发自小木虫Android客户端
回复此楼
8楼2015-11-11 16:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shanyue00

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也遇到这个现象。。。。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
14楼2015-11-12 00:21:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shanyue00

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 草溪河 at 2015-11-11 15:44:08
很正常，比如要是引物位于两个外显子间就不容易扩出来

可否详细说明一下为什么呢

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
15楼2015-11-12 00:23:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

~春梦秋云~

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
理论上可以p出，实际上情况有点麻烦，看你的基因大小，有的基因虽然cDNA只有1000-2000bp，gDNA可能有8000多。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
16楼2015-11-12 00:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 我爱罗的风沙 at 2015-11-12 00:18:08
楼主好。CDNA是纯净的DNA，1比1合适，要么P出要么P不出；gDNA有许许多多非特异性产物能和他匹配，能否P出来，与它的浓度以及你引物浓度比例也有关。所以CDNA能扩出不代表gDNA能扩出。楼主可以假象，1mol gDNA中只有 ...

大神啊那请问是不是增加引物浓度会有比较好的结果？
赞一下 回复此楼
17楼2015-11-12 10:20:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by shanyue00 at 2015-11-12 00:21:58
我也遇到这个现象。。。。

那请问你解决了吗
赞一下 回复此楼
18楼2015-11-12 10:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 草溪河 at 2015-11-11 15:44:08
很正常，比如要是引物位于两个外显子间就不容易扩出来

你是说内含子吗，DNA也含有内含子的吧。。。。。
赞一下 回复此楼
19楼2015-11-12 10:21:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shanyue00

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2015-11-12 10:21:11
那请问你解决了吗...

没有，不知道为啥，片段也不大，就是扩不出来

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
20楼2015-11-12 10:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我爱罗的风沙

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2015-11-12 10:20:43
大神啊那请问是不是增加引物浓度会有比较好的结果？...

我给出如下建议：①PCR的时候拉一个温度梯度，如果能P出淡淡条带，楼主就可以适当增加退火温度，加强引物特异性。②看一下gDNA浓度是否很低，可以尝试增加模板浓度。你现在用的应该是1ul把？你可以增加到1.5-2ul。③重新设计引物。 这里引物浓度影响不会很大~
赞一下 回复此楼
21楼2015-11-12 11:18:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草溪河

铁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
19楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2015-11-12 10:21:55
你是说内含子吗，DNA也含有内含子的吧。。。。。...

真核生物DNA有内含子。你的dna扩其他的核酸片段能扩出来吗？如果扩不出来，就要考虑DNA 质量。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
22楼2015-11-12 18:46:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 我爱罗的风沙 at 2015-11-12 11:18:15
我给出如下建议：①PCR的时候拉一个温度梯度，如果能P出淡淡条带，楼主就可以适当增加退火温度，加强引物特异性。②看一下gDNA浓度是否很低，可以尝试增加模板浓度。你现在用的应该是1ul把？你可以增加到1.5-2ul。 ...

好的，学习了，谢谢
回复此楼
24楼2015-11-17 16:55:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
syhorchid3楼
2015-11-11 15:40   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
dmbb5楼
2015-11-11 15:57   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
tzynew6楼
2015-11-11 15:57   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
zhuguiqiu7楼
2015-11-11 15:59   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
哦
qqaoqq9楼
2015-11-11 16:05   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
ZloveA10楼
2015-11-11 16:05   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
祝福
fw_xiao11楼
2015-11-11 16:05   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
假大空12楼
2015-11-11 16:12   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 苯丙氨酸-PAL 的主题更新
241/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭