应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR产物为什么切不开
51/1返回列表
查看: 1558  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 gaofei047290 的 10 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

gaofei047290

[交流] PCR产物为什么切不开

我做的是PCR-RFLP法分析SNP：
引物是参照文献设计，takara合成的。
订购的是takara的Taq酶。
PCR 条件也是文献中的，1%琼脂糖电泳显示PCR产物大小为290bp。
用文献报道的Msp I 1μL，PCR产物10μL,酶切4小时（16小时也切过），3%琼脂糖电泳显示产物为310bp左右。
切开的片段应该为168bp和122bp。
为什么酶切产物变大了？为什么PCR产物没有被切开呢？
试了很多次都不行，也换过很多模板，但都是这种情况，takara书上说可能是蛋白质的影响，但是酶切产物电泳同时使用了内切酶提供的10×buffer还是这种情况,是在是困惑！谢谢大家
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-09-12 22:10:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ningluztt

铜虫 (小有名气)
可以，
1.有杂带的话用胶回收，有一种梳子梳孔很大，就是专门用于大量DNA胶回收的
2.没有杂带的话尝试用1/10体积的醋酸钠，3体积的无水乙醇进行纯化，再进行酶切，但这种方法要注意不要把DNA 弄丢了
赞一下 回复此楼
9楼2008-09-16 09:58:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)
上图看看。我实验室有一例类似情况，属于引物合成错误，也可测序看看。
赞一下 回复此楼
2楼2008-09-13 00:18:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhongdianshi

银虫 (小有名气)
首先，假定你的PCR没有问题。MspI 不是很常用的酶，所以酶切效率会很低，最好是把PCR产物纯化一下再酶切。另外，建议加个酶切前的做个对照。好运。
引用回帖:
Originally posted by gaofei047290 at 2008-9-12 22:10:
我做的是PCR-RFLP法分析SNP：
引物是参照文献设计，takara合成的。
订购的是takara的Taq酶。
PCR 条件也是文献中的，1%琼脂糖电泳显示PCR产物大小为290bp。
用文献报道的Msp I 1μL，PCR产物10μL,酶切4小时（ ...

赞一下 回复此楼
3楼2008-09-13 02:21:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaofei047290

谢谢回帖的虫友！
PCR产物怎么纯化呢？可否加大内切酶的用量？
酶切前的pcr产物做过对照，酶切后产物明显比PCR产物变大。
takara合成的引物质量可以吗？
请介绍一家合成引物较好的公司。谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2008-09-13 20:31:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:54 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:45 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 20:43 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:43 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-05 20:34 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:23 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 11/550 2026-11-05 20:21 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:21 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-05 20:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 6/300 2026-11-05 18:00 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-05 17:58 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 kvewwGtKktqB 2026-11-04 8/400 2026-11-05 17:47 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 13/650 2026-11-05 17:47 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 17:26 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 19/950 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-05 17:15 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 10:39 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭