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gaofei047290

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[交流] PCR产物为什么切不开

我做的是PCR-RFLP法分析SNP：
引物是参照文献设计，takara合成的。
订购的是takara的Taq酶。
PCR 条件也是文献中的，1%琼脂糖电泳显示PCR产物大小为290bp。
用文献报道的Msp I 1μL，PCR产物10μL,酶切4小时（16小时也切过），3%琼脂糖电泳显示产物为310bp左右。
切开的片段应该为168bp和122bp。
为什么酶切产物变大了？为什么PCR产物没有被切开呢？
试了很多次都不行，也换过很多模板，但都是这种情况，takara书上说可能是蛋白质的影响，但是酶切产物电泳同时使用了内切酶提供的10×buffer还是这种情况,是在是困惑！谢谢大家

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1楼 2008-09-12 22:10:36

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zhongdianshi

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首先，假定你的PCR没有问题。MspI 不是很常用的酶，所以酶切效率会很低，最好是把PCR产物纯化一下再酶切。另外，建议加个酶切前的做个对照。好运。

引用回帖:

Originally posted by gaofei047290 at 2008-9-12 22:10:
我做的是PCR-RFLP法分析SNP：
引物是参照文献设计，takara合成的。
订购的是takara的Taq酶。
PCR 条件也是文献中的，1%琼脂糖电泳显示PCR产物大小为290bp。
用文献报道的Msp I 1μL，PCR产物10μL,酶切4小时（ ...