24小时热门版块排行榜    

查看: 1386  |  回复: 10
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 gaofei047290 的 10 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

gaofei047290

[交流] PCR产物为什么切不开

我做的是PCR-RFLP法分析SNP:
引物是参照文献设计,takara合成的。
订购的是takara的Taq酶。
PCR 条件也是文献中的,1%琼脂糖电泳显示PCR产物大小为290bp。
用文献报道的Msp I 1μL,PCR产物10μL,酶切4小时(16小时也切过),3%琼脂糖电泳显示产物为310bp左右。
切开的片段应该为168bp和122bp。
为什么酶切产物变大了?为什么PCR产物没有被切开呢?
试了很多次都不行,也换过很多模板,但都是这种情况,takara书上说可能是蛋白质的影响,但是酶切产物电泳同时使用了内切酶提供的10×buffer还是这种情况,是在是困惑!谢谢大家
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaofei047290

大量的pcr产物纯化现不现实啊?
请教
8楼2008-09-15 23:22:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)

上图看看。我实验室有一例类似情况,属于引物合成错误,也可测序看看。
2楼2008-09-13 00:18:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhongdianshi

银虫 (小有名气)

首先,假定你的PCR没有问题。MspI 不是很常用的酶,所以酶切效率会很低,最好是把PCR产物纯化一下再酶切。另外,建议加个酶切前的做个对照。好运。
引用回帖:
Originally posted by gaofei047290 at 2008-9-12 22:10:
我做的是PCR-RFLP法分析SNP:
引物是参照文献设计,takara合成的。
订购的是takara的Taq酶。
PCR 条件也是文献中的,1%琼脂糖电泳显示PCR产物大小为290bp。
用文献报道的Msp I 1μL,PCR产物10μL,酶切4小时( ...

3楼2008-09-13 02:21:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaofei047290

谢谢回帖的虫友!
PCR产物怎么纯化呢?可否加大内切酶的用量?
酶切前的pcr产物做过对照,酶切后产物明显比PCR产物变大。
takara合成的引物质量可以吗?
请介绍一家合成引物较好的公司。谢谢
4楼2008-09-13 20:31:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +7 羊腰板 2026-08-21 7/350 2026-08-21 21:28 by iwuli
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 人气不行了 +7 fansofjerry 2026-08-21 7/350 2026-08-21 14:13 by Vivilian
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见