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冷冷月光

银虫 (小有名气)

[求助] 关于解旋DNA双链的方法求助 已有2人参与

小弟刚刚入门，想将DNA解旋
我是用的方法是 1mM Na2EDTA和300mM NaOH，调pH＞13。总用时间30min
但是怎么试验都感觉不是很成功。大虾门都使用什么方法啊？如果有这类文献更好了。合适的话发我邮箱zhaiflavour@163.com。
希望大家积极发言啊。拜谢了。
谢谢各位大虾啦！
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有些事情只有经过时间的积累，才能够有所收获！
1楼 2015-11-06 21:31:16
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冷冷月光

银虫 (小有名气)
其实就是做dna传感，电极表面固定单链dna，检测到目标dna了，就会出电信号。但是现在想检测重复性，必须要把双链dna解旋下来，然后再杂化。再测试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2015-11-06 23:50:27
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邪恶的大肉丸

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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5楼: Originally posted by 冷冷月光 at 2015-11-06 23:50:27
其实就是做dna传感，电极表面固定单链dna，检测到目标dna了，就会出电信号。但是现在想检测重复性，必须要把双链dna解旋下来，然后再杂化。再测试。

不做这个方向，不甚了解。解旋应该是成熟操作，如果上述方法是文献报道，应该就没什么问题。只是：1 你是根据什么判断问题出在DNA解旋和再杂化这一环节呢？ 2 你的单链DNA是通过什么方法固定在电极表面的？处理DNA解旋时用的溶液环境，是否会破坏电极连接。（判断这个也挺简单，有没有相关实验结果，首先DNA连接到电极表面，再用碱处理，最后检测targetDNA，看是否还有信号）
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7楼2015-11-07 13:05:02
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陈爱中

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的溶液ph那么高，dna链有可能都让你打断了，而不是解螺旋。

甲酰胺溶液就可以或者其他高离子浓度的溶液（参考核酸杂交 洗脱溶液的组分就可以） 都可以让DNA解螺旋。

不知道你说的解旋是不是说解螺旋。。。
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8楼2015-11-07 19:20:41
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陈爱中

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 冷冷月光 at 2015-11-08 08:30:47
哦，我说的是双链dna解螺旋，变成单链dna。
...

那就甲酰胺溶液或者尿素溶液就可以，简单暴力，破坏氢键双链就打开了。还有就是sds溶液也可以，sds里面还可以加氢氧化钠。

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11楼2015-11-08 08:50:54
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普通回帖

冷冷月光

银虫 (小有名气)
自己顶一个，愿得一答案，散光全部金币。
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2楼2015-11-06 21:32:20
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冷冷月光

银虫 (小有名气)
再顶顶。。。
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3楼2015-11-06 22:18:18
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
你想要干啥？

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4楼2015-11-06 23:23:18
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冷冷月光

银虫 (小有名气)
起床顶一下～

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6楼2015-11-07 07:46:55
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冷冷月光

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-11-07 19:20:41
你的溶液ph那么高，dna链有可能都让你打断了，而不是解螺旋。

甲酰胺溶液就可以或者其他高离子浓度的溶液（参考核酸杂交 洗脱溶液的组分就可以） 都可以让DNA解螺旋。

不知道你说的解旋是不是说解螺旋。。。

哦，我那个也是看到小木虫上的一条帖子。刚入门，没有看过什么相关文献，可以具体讲讲吗？

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9楼2015-11-08 08:29:03
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冷冷月光

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-11-07 19:20:41
你的溶液ph那么高，dna链有可能都让你打断了，而不是解螺旋。

甲酰胺溶液就可以或者其他高离子浓度的溶液（参考核酸杂交 洗脱溶液的组分就可以） 都可以让DNA解螺旋。

不知道你说的解旋是不是说解螺旋。。。

哦，我说的是双链dna解螺旋，变成单链dna。

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10楼2015-11-08 08:30:47
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