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lchxs465

禁虫 (初入文坛)

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lchxs465

禁虫 (初入文坛)

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7楼2015-11-03 15:52:45
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djbitter

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-11-03 22:59:25
可能不能用蓝白斑,印象中宿主菌为BL21,本身可变蓝;片段与载体合适连接比,可同时用几种比例;片段、载体量与纯度;如果自连率高,是否载体双酶切效率低。
2楼2015-11-03 11:38:26
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足下客

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-11-03 22:59:42
lchxs465: 金币+5 2015-11-04 17:43:54
lchxs465: 金币+5 2015-11-04 17:45:02
1. 你的目的基因条带酶切完回收后条带亮度如何?连接体系中加入目的基因的量一般要看回收后的亮度决定,我以前一般用4:1的比例就可以连上。
2. 你选的是哪两个酶切位点,最好选粘性末端的,平末端的很难连。再者有些酶切位点本身就不好连,尽量选常见的酶切位点,像HindIII,EcorI之类的,都好连。
3. 你要确认你的载体是已经切开的,如果没有切开,自然是连不上的,这个酶切完后可以跑电泳确认一下。
3楼2015-11-03 13:19:04
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wxb2061

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-03 22:59:59
空载的载体酶切真心不好确认,我得是ndel和hindlll位点,跑胶根本看不到,现在正在做,前一次就是连不上,菌落都是一丁点的样子,一看就不是连接上的菌,我转化是dh5a,同样28a载体。下午转化,自求多福啊!

发自小木虫Android客户端
走在途中……
4楼2015-11-03 14:31:28
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