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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bayu18

新虫 (正式写手)

[求助] hiTail-PCR引物设计

最近要做hiTail-PCR,也是第一次做,现在在设计引物,简并引物是已知的,但在特异性引物设计上遇到一点问题:
1、三条特异性引物的长度上有什么要求?
2、我看参考文献上(liu and chen ,2007)说特异性引物的退火温度在65-68度,但我在有些论坛上看说要68度以上,还有的说是65度左右,到底特异性引物的退火温度的标准是多少?
3、有的论坛说做第一轮PCR的时候可以把简并引物混一块做,可以么?
4、hiTail-PCR的程序完全按照参考文献(liu and chen ,2007)上的做?有没有需要改动的?
非常感谢各位大侠相助!!!!
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bayu18

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bayu18 at 2015-11-03 08:06:43
引物的G+C含量有没有要求?...

退火温度68度,不可能都正好是68度吧,都要大于68度?引物之间的退火温度差异控制在多少?
4楼2015-11-03 08:09:03
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大brain

银虫 (小有名气)

1、引物长度依据其退火温度设计
2、退火温度68度
3、可以混合
4、文章上的程序就可以用,不用改

发自小木虫Android客户端
态度很重要
2楼2015-11-03 00:04:05
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bayu18

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 大brain at 2015-11-03 00:04:05
1、引物长度依据其退火温度设计
2、退火温度68度
3、可以混合
4、文章上的程序就可以用,不用改

引物的G+C含量有没有要求?
3楼2015-11-03 08:06:43
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踏雪无痕love

金虫 (正式写手)

请问楼主,你的hiTAIL-PCR做出来了么?以上的几个问题解决了吗?是怎么解决的,我最近也在做hiTAIL-PCR,有好多问题,到那时不知道该问谁,很是疑惑,非常期待楼主能帮忙解答一下,感激不尽....
5楼2016-03-14 18:27:17
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