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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » hiTail-PCR引物设计
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bayu18

新虫 (正式写手)

[求助] hiTail-PCR引物设计

最近要做hiTail-PCR，也是第一次做，现在在设计引物，简并引物是已知的，但在特异性引物设计上遇到一点问题：
1、三条特异性引物的长度上有什么要求？
2、我看参考文献上（liu and chen ，2007）说特异性引物的退火温度在65-68度，但我在有些论坛上看说要68度以上，还有的说是65度左右，到底特异性引物的退火温度的标准是多少？
3、有的论坛说做第一轮PCR的时候可以把简并引物混一块做，可以么？
4、hiTail-PCR的程序完全按照参考文献（liu and chen ，2007）上的做？有没有需要改动的？
非常感谢各位大侠相助！！！！
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1楼 2015-11-02 20:40:23
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大brain

银虫 (小有名气)
1、引物长度依据其退火温度设计
2、退火温度68度
3、可以混合
4、文章上的程序就可以用，不用改

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态度很重要
2楼2015-11-03 00:04:05
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bayu18

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 大brain at 2015-11-03 00:04:05
1、引物长度依据其退火温度设计
2、退火温度68度
3、可以混合
4、文章上的程序就可以用，不用改

引物的G+C含量有没有要求？
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3楼2015-11-03 08:06:43
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bayu18

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bayu18 at 2015-11-03 08:06:43
引物的G+C含量有没有要求？...

退火温度68度，不可能都正好是68度吧，都要大于68度？引物之间的退火温度差异控制在多少？
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4楼2015-11-03 08:09:03
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踏雪无痕love

金虫 (正式写手)
请问楼主，你的hiTAIL-PCR做出来了么？以上的几个问题解决了吗？是怎么解决的，我最近也在做hiTAIL-PCR，有好多问题，到那时不知道该问谁，很是疑惑，非常期待楼主能帮忙解答一下，感激不尽....
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5楼2016-03-14 18:27:17
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