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[求助]
hiTail-PCR引物设计
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最近要做hiTail-PCR，也是第一次做，现在在设计引物，简并引物是已知的，但在特异性引物设计上遇到一点问题： 1、三条特异性引物的长度上有什么要求？ 2、我看参考文献上（liu and chen ，2007）说特异性引物的退火温度在65-68度，但我在有些论坛上看说要68度以上，还有的说是65度左右，到底特异性引物的退火温度的标准是多少？ 3、有的论坛说做第一轮PCR的时候可以把简并引物混一块做，可以么？ 4、hiTail-PCR的程序完全按照参考文献（liu and chen ，2007）上的做？有没有需要改动的？ 非常感谢各位大侠相助！！！！ |
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