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xiaochen9002

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化不出来…… 已有6人参与

手上有一个蛋白,大肠表达后镍柱纯化,得到了目的条带,但是还有三条杂带,估计是截短表达的蛋白。目前已经用了好多方法去除杂带,50KDa的超滤管,阴阳离子交换柱以及分子筛,都没分开,不知道各位有什么好的方法没?实在快疯了,  电泳图附上,红色的是我要的条带,静候各位大牛的解答!

蛋白纯化不出来……
效果图.png
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等待晨曦

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xiaochen9002: 金币+5, 有帮助 2015-11-07 18:05:17
摸索纯化条件,我第一次纯化就是摸索,目前纯化了至少12种蛋白。

[ 发自小木虫客户端 ]
严于律己,宽以待人
29楼2015-10-30 18:38:28
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
分子量看起来差了不少,分子筛一点效果都没有?超滤管一般达不到那么好的纯化效果的。实在不行重新构建吧~
2楼2015-10-28 16:26:44
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xiaochen9002

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-10-28 16:26:44
分子量看起来差了不少,分子筛一点效果都没有?超滤管一般达不到那么好的纯化效果的。实在不行重新构建吧~

分子筛只用过一次,从电泳图上看不出显著地纯化效果。是不是优化下条件就可以了?
3楼2015-10-28 16:42:33
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a86052

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-10-28 16:42:33
分子筛只用过一次,从电泳图上看不出显著地纯化效果。是不是优化下条件就可以了?...

不一定的,因为你既然从电泳图上看不出纯化效果,也许过分子筛并不能达到要求。如果像你说的,这些是截短表达,那么构建个C端标签的也许会更好。你可以先检测下是不是截短的蛋白
4楼2015-10-28 16:56:46
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