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ietey

新虫 (小有名气)

[求助] RNAi是降解特定mRNA上的一段序列还是把整段mRNA全都讲解了? 已有1人参与

RT。一般进行RNA干扰的时候我们实验室一般都是合成一段21mer左右的mRNA同源核酸序列插到干扰载体里看到RNAi是由Dicer酶和RISC沉默诱导复合体介导的过程。那么被降解的一段是否只是干扰序列呢?
小弟甚是疑惑,请各位大神解答,最好有引用出处,3Q
小弟是做LncRNA这块的,干扰LncRNA据说和干扰mRNA有些不同,那么不知道有什么好的方法呢,我看文献一般都是用慢病毒进行干扰的,进行常规干扰载体插入一段shRNA的方法是否不太好呢?
还有如果是做过表达的话呢,我看到也是很多文章用的慢病毒,老板非要我查查能不能用常规载体进行过表达(主要是考虑表达效率这块,因为LncRNA有的长4k、5k的都有),大家有没有好一点的建议?不胜感激
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ietey: 金币+20 2016-01-14 12:27:00
选一个区段作靶标,最后的效果是整个mRNA都降解了

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2楼2015-10-27 17:50:08
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jackyoung

新虫 (正式写手)

通俗地讲,siRNA加载到AGO上结合目标序列造成剪切,切断的mRNA由于木有保护会受到外切核酸酶的攻击发生5'-3'或3'-5'降解,同时这些被打断的mRNA也可以造成激活机体的沉默机制,通过RDR的括增和Dicer(植物中为DCL)的剪切,产生次级的siRNA。(以上是根据植物中的过程瞎说的,动物中不得而知,勿喷。)

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CestLaVie
3楼2015-10-28 00:33:33
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